程：         

1、原理及適用范圍
        菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的微生物檢測項(xiàng)目。菌落總數(shù)測試片（Filmplate^TM Aerobic BB202）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強(qiáng)計數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定，也可用于檢測食品加工容器、操作臺和其他設(shè)備表面的菌落總數(shù)。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定（GB/T 4789.2-2010）。

2、操作方法
        2.1、樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
        2.2、接種：一般食品選2～3個稀釋度進(jìn)行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數(shù)測試片（BB202）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養(yǎng)基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
        2.3、培養(yǎng)：將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48h。

3、結(jié)果判讀
        細(xì)菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數(shù)適中（30～300個）的測試片進(jìn)行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。
                                                                                            
4、計數(shù)原則及報告方式
       4.1、若只有一個稀釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個紙片菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升（或克）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。
       4.2、若有兩個連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按式（1）計算: 
                                                                                                                  
       式中：
       N——樣品中菌落數(shù)；
       ∑C——測試片上（含適宜范圍菌落數(shù)的測試片）菌落數(shù)之和；
       n₁——*個適宜稀釋度測試片數(shù)；
       n₂——第二個適宜稀釋度測試片數(shù)；
         d——稀釋因子（*稀釋度）。
       示例：
                                                        

                                                                                           上述數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入”后，表示25000或2.5×10⁴。
        4.3、若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300CFU，則對稀釋度zui高的測試片進(jìn)行計數(shù)，其他測試片可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以zui高稀釋倍數(shù)計算。
        4.4、若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
        4.5、若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以zui低稀釋倍數(shù)計算。
        4.6、若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30CFU～300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU，則以zui接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
        4.7、菌落總數(shù)的報告
           4.7.1、菌落總數(shù)在100CFU以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。
           4.7.2、大于或等于100CFU時，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代替位數(shù)，也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。
           4.7.3、若測試片上一片紅色無法計數(shù)時，則報告多不可計。
           4.7.4、若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。
           4.7.5、稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。

5、表面取樣方法
        加1mL滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在測試片上，至少靜置10S，使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

6、附加說明
         6.1、菌落總數(shù)測試片檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)瓊脂平板法符合率可達(dá)80％以上，山東省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的驗(yàn)證試驗(yàn)表明，24h計數(shù)測試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的87％。
         6.2、磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。
         6.3、生理鹽水的配制與滅菌：取8.5g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000mL蒸餾水或純凈水中，先煮開后進(jìn)行分裝，取9mL加入到10mL潔凈試管中，蓋上硅橡膠塞或棉紗塞，放入紅外線消毒柜中消毒。

7、保存條件
        本產(chǎn)品需存放在4℃～10℃冰箱中，保質(zhì)期為一年，鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好，放到冰箱中，一個月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水，在拆封前將整包回溫至室溫。