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上海力敏實業(yè)有限公司

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qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit逆轉錄試劑盒

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  • 上海力敏實業(yè)有限公司
  • 2016-02-04 02:36:05
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【簡單介紹】

QuantiTect Reverse Transcription Kit方便快速的操作過程可實現(xiàn)高效的逆轉錄,并有效去除基因組DNA。應用gDNA Wipeout Buffer可高效去除RNA樣本中的基因組DNA污染。通過逆轉錄酶、緩沖夜和*的引物混合物可實現(xiàn)高效的逆轉錄。合成的cDNA經(jīng)過優(yōu)化可用于real-time PCR, 實現(xiàn)mRNA轉錄本所有區(qū)域的靶分子進行可靠的定量

【詳細說明】

  • cDNA合成和gDNA去除僅用20分鐘完成
  • 有效去除基因組DNA,無需設計RNA特異性引物或探針
  • 高特異性,即便是低豐度的轉錄本也能獲得高產量的cDNA
  • 轉錄本的5' 和3' 端區(qū)域都可以進行cDNA 合成

For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water

逆轉錄試劑盒組分確保高效、高靈敏的Real-Time RT-PCR

組分 優(yōu)點
gDNA Wipeout Buffer 僅在real-time RT-PCR 中檢測RNA
Quantiscript Reverse Transcriptase

可用于廣泛RNA起始量(10 pg to 1 µg RNA),高特異性

Quantiscript RT Buffer 可通讀困難模板
RT Primer Mix 所有轉錄本區(qū)域合成cDNA, 甚至從5' 端區(qū)域

原理

為獲得準確的real-time RT-PCR基因表達分析結果,很重要的是僅擴增和檢測cDNA?;蚪MDNA的干擾可通過設計橫跨外顯子/外顯子邊界的引物或探針避免。盡管如此,在某些特殊情況下(如:cDNA來自一個單外顯子基因),起始RNA樣品必須無基因組DNA。

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因組DNA污染物可使用*的gDNA去除緩沖液迅速有效的去除(見圖:“高效去除基因組DNA,確保精確的Real-Time RT-PCR”)。因為純化RNA樣品后無需另外采用DNA酶消化,從而可節(jié)省時間和費用。并且也無需設計RNA特異性引物和探針。

低豐度轉錄本獲得更高產量的cDNA

  CT values for IL12A
(low expression)

CT values for IL1RN
(higher expression)

Input RNA (ng) QIAGEN Supplier AII QIAGEN Supplier AII
1000 30.9 32.0 23.1 24.9
100 34.2 35.4 26.3 26.6
10 37.8 46.8 29.7 30.3
1 N.D. N.D. 32.4 34.5

應用Real-time,兩步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN,起始RNA量不同 。應用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或來自供應商Supplier AII的試劑盒逆轉錄總 RNA 。在 ABI PRISM 7900 上應用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的。 應用凱杰試劑盒CT值較低,尤其中等豐度的基因IL12A(粗體),cDNA產量更高。N.D.:未檢測(Not detected)。

RT Primer Mix包含有特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機引物的混合物,使cDNA合成可從RNA轉錄本的各個區(qū)域起始,甚至可從5'區(qū)域開始(見圖:“高靈敏度檢測12.5 kb 轉錄本5'區(qū)域的靶分子”)。相對于其他供應商提供的試劑盒來說,QuantiTect Reverse Transcription Kit為real-time PCR分析提供高產量的cDNA,無需考慮待擴增目標序列位于轉錄本的哪個區(qū)域。同時,QuantiTect Reverse Transcription Kit也確保了real-time RT-PCR結果更好的重復性。

 

操作流程

使用QuantiTect逆轉錄試劑盒可在20分鐘內去除基因組DNA和合成cDNA(見流程圖)。由于兩個反應均在同一孵育溫度并使用預混液構建反應,因此操作過程快速且方便。相反,供應商I提供的試劑盒操作需更多移液步驟且經(jīng)常需要調整孵育溫度,因此需要更長時間和更多手動操作。

 

應用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可從各種類型的起始樣品中合成cDNA以實現(xiàn)高效和高靈敏度的real-time RT-PCR,包括激光顯微切割樣品和活組織切片樣品。與其他供應商提供的試劑相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit在檢測低豐度基因時具有更高的靈敏度(見圖:“Real-Time,兩步法RT-PCR精確度更高”)。

為獲得高特異性和高靈敏度的real-time RT-PCR結果,又避免耗時的反應步驟優(yōu)化過程,我們推薦QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect產品聯(lián)合使用。包括經(jīng)優(yōu)化的PCR反應預混液和即用型引物,使用SYBR Green染料法或序列特異性探針法進行 real-time RT-PCR。

Images

高效去除基因組DNA,確保精確的Real-Time RT-PCR — A 高靈敏度檢測12.5 kb轉錄本5'區(qū)域的靶分子 快速方便的cDNA合成 高靈敏度的Real-Time,兩步法RT-PCR

 

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