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在Western Bloting實驗中,可能存在總蛋白濃度測定不準確,或者蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時產(chǎn)生的樣品間的操作誤差;這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參,比如內(nèi)參GAPDH的含量來進行校正。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶,由4個30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa,檢測條帶大約在36kDa。 GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達,廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標準化的內(nèi)參。
如何選擇合適的GAPDH抗體?
內(nèi)參抗體雖然選擇較多,但是也需要遵循一定的原則,并契合實際的應(yīng)用要求。首先,我們需要考慮目的蛋白的大小,我們推薦內(nèi)參要與檢測的目的蛋白的分 子量相差5KD以上,因此你需要根據(jù)你目的檢測蛋白的分子量來選擇合適的內(nèi)參,由于GAPDH的檢測分子量大約在36kD,因此該內(nèi)參抗體不是很適合用于檢測30kD-40kD大小目標蛋白的WB實驗中。另外,不同的組織來源的樣本在選擇內(nèi)參時還有一定的區(qū)別。比如某些細胞中,由于組織缺氧、糖尿病等因素會導致GAPDH的表達增高,不適合做內(nèi)參。
因為檢測的目的蛋白分子量在50kD左右,之前的β-Tubulin不是很適合,就購買了一支Abbkine的GAPDH抗體做內(nèi)參,效價確實有點驚訝,我用1:1000倍起始稀釋覺得條帶很濃,后來一直到1:8000稀釋,同時減少了曝光時間,條帶仍然很清晰。——武漢大學生命*一客戶
產(chǎn)品名稱及描述 | 品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品說明 |
Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01020 | 詳情 |
HRP Conjugated Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01025 | 詳情 |
一般來說,內(nèi)參抗體可檢測的種屬類型越多,在使用過程中的選擇余地就越大;而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外,抗體的效價也是考察該抗體性價比的重要方面,也即相當于實際應(yīng)用時的稀釋比率。一個效價高的100μl GAPDH抗體(假如其WB檢測的稀釋比率是1:5000,zui終使用液相當于500ml),要比效價低的1ml的GAPDH抗體(假如 WB檢測的稀釋比率是 1:200,zui終使用液相當于2ml)性價比更高。因此在選擇抗體的時候,不但需要考慮抗體的量,還需要考慮抗體的效價,即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。
為什么選擇推薦Abbkine品牌的GAPDH抗體?
供應(yīng)GAPDH抗體的進口品牌有很多,像Abcam、Santa Cruz、Cell Signaling(CST)、Millipore等都有相關(guān)GAPDH抗體提供。但是由于不是專門的標簽和內(nèi)參抗體供應(yīng)商,因此在性價比上不是*的選擇, 以Abcam為例,其一支100μl GAPDH抗體的RMB報價為¥4418;CST的一支100μl GAPDH抗體的報價是¥2997。
另外,一些國內(nèi)的供貨商也能提供分裝的GAPDH抗體,但是在品牌和質(zhì)量保障上都有不足。國產(chǎn)分裝的GAPDH體在質(zhì)量穩(wěn)定性上有不足,并且經(jīng)過分裝以后,其效價也有損失。而原產(chǎn)于國內(nèi)實驗室的GAPDH抗體有些具有較好的檢測活性,但是在應(yīng)用類型上有差距,并且在批次之間的穩(wěn)定性上較難控制,而國內(nèi)僅有的少量原產(chǎn)抗體也是多克隆抗體。如果您想買到一支性價比更高,同時也是*品牌的GAPDH內(nèi)參抗體,那 Abbkine可能會是您的一個重要考慮選項之一。我們向您推薦Abbkine的GAPHD單克隆內(nèi)參抗體Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5)(貨 號A01020)。
產(chǎn)品名稱及描述 | 品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品說明 |
Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01020 | 詳情 |
HRP Conjugated Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01025 | 詳情 |
該抗體單克隆抗體,克隆號為2B5。其抗原為同時具有蛋白特異性和種屬通用性的GAPDH蛋白部分序列,其檢測種屬非常的廣泛,可識別人、小鼠、兔、大鼠、猴、狗、雞、豬和綿羊的GAPDH蛋白,也算是一個真正保守的內(nèi)參抗體。另外,該抗體的效價非常高,WB實驗推薦稀釋比率為 1:1000-1:10,000,甚至有客戶報告更高的稀釋比率。
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Abbkine還提供大包裝1ml的GAPDH內(nèi)參抗體,非常適合經(jīng)常進行內(nèi)參驗證或校準,或者進行細胞骨架熒 光定位的免疫學實驗需求。為方便客戶 的使用, 上述產(chǎn)品,Abbkine均在中國備有現(xiàn)貨。Abbkine針對中國市場,提供化的產(chǎn)品質(zhì)量追蹤和售后服務(wù)以及保障,如果您在使用過程中有任何問題, 請直接與其當?shù)卮砩贪澜菘萍加邢薰尽?/p>
產(chǎn)品名稱及描述 | 品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品說明 |
Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01020 | 詳情 |
HRP Conjugated Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01025 | 詳情 |
美國Abbkine品牌是一家提供高性價比免疫學和細胞學科研產(chǎn)品及解決方案的品牌,艾美捷將其引入中國,作為其中國區(qū)域代理,將為客戶提供性 價比的常規(guī)免疫學試劑,如各種標簽抗體、內(nèi)參抗體、常規(guī)一抗以及全系列二抗,抗體檢測底物以及相關(guān)試劑盒等。同時我們作為多家的的中國代理或 區(qū)域代理,艾美捷能為您提供系列的實驗室解決方案。如果您對上述產(chǎn)品感興趣,請致電免費客戶專線轉(zhuǎn)801/802/803 或者/4876到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實驗解決方案
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