臭氧具有不穩(wěn)定特性和很強(qiáng)的氧化能力。臭氧是由一個(gè)氧分子(O2)攜帶一個(gè)氧原子(O)組成,是氧氣的同素異形體。與氧氣相比,臭氧比重大、有味、有色、易溶于水、易分解。由于臭氧(O3)是由氧分子攜帶一個(gè)氧原子組成,決定了它只是一種暫存形態(tài),攜帶的氧原子除氧化用掉外,剩余的雙組合為氧氣(O2)進(jìn)入穩(wěn)定狀態(tài)。所以臭氧工作中沒有二次污染產(chǎn)生,這是臭氧技術(shù)應(yīng)用的大*性。
臭氧的應(yīng)用主要是滅菌消毒。這主要是因?yàn)槌粞跤?的氧化能力,臭氧在一定濃度下能與細(xì)菌、病毒、病原體等微生物產(chǎn)生生化反應(yīng)。臭氧具有很高的能量,在常溫、常壓下很快自行分解為氧(O2)和單個(gè)氧原子(O),單個(gè)氧原子具有很強(qiáng)的活性,對(duì)細(xì)菌、病毒、病原體等微生物具有較強(qiáng)的氧化作用。
臭氧能氧化分解細(xì)菌、病毒內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的葡萄糖氧化酶,并直接與細(xì)菌、病毒發(fā)生作用,氧化并穿透其細(xì)胞壁,破壞其細(xì)胞器和核糖核酸,分解DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)類和多糖等大分子聚合物,使細(xì)菌、病毒的新陳代謝和繁殖過程遭到破壞,而奪取細(xì)菌病毒的生命。同時(shí)還可以滲透細(xì)胞膜組織,侵入細(xì)胞膜內(nèi)作用于外膜脂蛋白和內(nèi)部的脂多糖,使細(xì)胞發(fā)生通透性畸變,導(dǎo)致細(xì)胞溶解性死亡,并將死亡菌體內(nèi)的遺傳基因、寄生菌種、寄生病毒粒子、噬菌體、支原體及熱源(內(nèi)毒素)等溶解死亡。綜觀無菌技術(shù)對(duì)微生物作用的原理可分為抑菌型、殺菌和溶菌型三種。臭氧滅菌消毒屬于溶菌型劑體,可以達(dá)到“長(zhǎng)、*地消滅物體內(nèi)部所有微生物的目的”,而且它的作用是瞬間完成的。
臭氧作為性能優(yōu)良的消毒手段,在制藥企業(yè)GMP、醫(yī)療衛(wèi)生場(chǎng)所、食品加工車間、養(yǎng)殖業(yè)企業(yè)和居民日常生活等許多領(lǐng)域都大規(guī)模應(yīng)用,被稱為“綠色消毒劑”,在衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)臭氧殺菌消毒都有明確的肯定。
二、禽流感描述
禽流感是一種由正黏病毒科A型流感病毒引起禽類從呼吸系統(tǒng)到嚴(yán)重全身敗血癥等多種癥狀的傳染病,這類流感病毒有大量天然宿主。高致病性禽流感病毒的傳播是多維的,如空氣、糞便、飼料和飲水等;近年來蔓延的烈性禽類傳染病,暴發(fā)頻率呈幾何級(jí)數(shù)增加,并已跨越“種間隔離”襲擊和傳染人類。禽流感病毒傳染給人的死亡率高達(dá)60%。到目前為止,世界上大約有60人死于禽流感。如果禽流感交叉感染反復(fù)發(fā)作,病毒基因極易發(fā)生變異,就有可能造成人與人之間傳播的災(zāi)難,后果不堪設(shè)想。禽流感問題已不僅是關(guān)系食品安全的一般問題,而是危機(jī)人類的健康、生存和發(fā)展的嚴(yán)重問題。如何克服目前防控體系的缺陷,降低病毒的變異速度,有效地阻斷病毒的傳播途徑,創(chuàng)建新型的防控體系是解決禽流感問題的關(guān)鍵所在。
三、實(shí)驗(yàn)方法:
3、1實(shí)驗(yàn)方法
3、1、1體外滅活實(shí)驗(yàn)
按照實(shí)驗(yàn)室用臭氧發(fā)生器使用說明書規(guī)定程序操作,對(duì)負(fù)壓隔離器1立方米密閉空間內(nèi)放置的涂布有禽流感病毒(H5N2株)懸液和干燥病毒樣品的載波片分別進(jìn)行10分鐘、15分鐘、20分鐘和30分鐘的消毒效果檢測(cè);不同處理的樣品分別接種4枚9-10日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經(jīng)37℃72小時(shí)孵化,去掉24小時(shí)內(nèi)死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實(shí)驗(yàn)?! ?/span>
3、1、2空氣中病毒傳播阻斷實(shí)驗(yàn)
于兩臺(tái)負(fù)壓隔離器內(nèi)各飼養(yǎng)8周齡SPF雞15只,其中一組作為對(duì)照;按照實(shí)驗(yàn)室用廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器使用說明書規(guī)定程序操作,保持負(fù)壓隔離器溫度為22℃,濕度50%,打開廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器(保持2L/min氣體流量);隔離器內(nèi)通入臭氧10分鐘后通過氣溶膠發(fā)生器向隔離器內(nèi)2ML107.5EID50/0.1mlH5亞型(H5N2)病毒懸液;繼續(xù)通入臭氧60分鐘后關(guān)閉臭氧發(fā)生器;7天后無菌采集隔離器內(nèi)SPF雞肺臟,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組每只SPF雞肺臟研磨懸液接種4枚9-10日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經(jīng)37℃72小時(shí)孵化,去掉24小時(shí)內(nèi)死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實(shí)驗(yàn)。
3、1、3接種后同居感染實(shí)驗(yàn)
于兩臺(tái)負(fù)壓隔離器內(nèi)各放入12只8周齡SPF雞,各選2只接種H5N2亞型禽流感病毒,接種劑量為107.5EID50/0.1ml,肌肉注射0.2ml/只。每組其余10只SPF雞不攻毒,作為同居感染試驗(yàn);按照實(shí)驗(yàn)室用廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器使用說明書規(guī)定程序操作,保持負(fù)壓隔離器溫度為22℃,濕度50%,于攻毒后的第二天對(duì)其中一臺(tái)負(fù)壓隔離器接通廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器(保持2L/min氣體流量,設(shè)定為每工作1小時(shí)停機(jī)10分鐘);于攻毒后第2天開始分別采集隔離器內(nèi)未攻毒SPF雞咽拭子,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組每只SPF雞咽拭子接種4枚11日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經(jīng)37℃72小時(shí)孵化,去掉24小時(shí)內(nèi)死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實(shí)驗(yàn);于攻毒后7天分別無菌采集隔離器內(nèi)未攻毒SPF雞肺臟,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組每只SPF雞肺臟研磨懸液接種4枚11日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經(jīng)37℃72小時(shí)孵化,去掉24小時(shí)內(nèi)死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實(shí)驗(yàn)。
四、實(shí)驗(yàn)分析與結(jié)論:
4.1體外滅活實(shí)驗(yàn)
涂布有禽流感病毒(H5N2株)懸液的品載玻片與H5N2病毒干燥樣品載玻片通過20分鐘的高能態(tài)臭氧的處理后,雞胚病毒感染培養(yǎng)的結(jié)果均為陰性,即不能培養(yǎng)出禽流感病毒;而未經(jīng)臭氧處理的樣品則可以 的培養(yǎng)出病毒。這一結(jié)果表明臭氧對(duì)禽流感病毒的體外滅活作用是 有效的。
4.2空氣中病毒傳播阻斷實(shí)驗(yàn)
血凝檢測(cè)結(jié)果是:對(duì)照組(即不施用臭氧組)的15SPF 雞種, 其中有10支表現(xiàn)出雞肺臟接種雞胚尿囊液血凝實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性, 5是陰性,陽(yáng)性率為66.7%;施用臭氧組,15只雞的血凝實(shí)驗(yàn)均為陰性;
空氣中病毒傳播阻斷實(shí)驗(yàn)表明,本實(shí)驗(yàn)所采用的病毒懸液的噴霧在隔離室內(nèi)具有強(qiáng)的傳染特性,其七天內(nèi)的感染率高達(dá)66.7%。這一點(diǎn)證明我們所采用的方法是研究臭氧滅活禽流感病毒的有效的模式。施用臭氧組的15只雞的血凝實(shí)驗(yàn)均為陰性。這一結(jié)果表明臭氧對(duì)空氣中的禽流感病毒具有100%的滅活效果,可以充分地阻斷病毒在空氣中的傳播,抑制空氣中禽流感病毒對(duì)雞的感染。
4.3接種后同居感染實(shí)驗(yàn)
對(duì)照組(即未施用臭氧組)的未攻毒10只SPF雞與接種H5N2亞型禽流感病毒的雞接觸后第三天,其中5只咽拭子接種的雞胚尿囊液血凝實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性;在接觸后的第四天有9只咽拭子接種的雞胚尿囊液血凝實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性; 在接觸后的第七天,該9支雞肺臟研磨懸液接種雞胚尿囊液血凝實(shí)驗(yàn)均為陽(yáng)性,其同居接觸感染率高達(dá)90% 。
施用臭氧的實(shí)驗(yàn)組的未攻毒10只SPF雞與接種H5N2亞型禽流感病毒的雞接觸后第三天的咽拭子接種的雞胚尿囊液血凝實(shí)驗(yàn)未出現(xiàn)陽(yáng)性,在第四天有5只表現(xiàn)出了陽(yáng)性;在第七天有6只雞的雞肺臟研磨懸液接種雞胚尿囊液血凝實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)為陽(yáng)性,其同居接觸感染率為60% 。同居感染實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說明:施用臭氧表現(xiàn)出臭氧具有延遲接觸傳染時(shí)間的現(xiàn)象,起到了阻礙禽流感傳染的作用。
廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器:
原載: 養(yǎng)殖場(chǎng)臭氧發(fā)生器
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