為什么要進行微生物限度檢測方法的驗證?是為了確認所采用方法適合藥品細菌、霉菌、酵母菌數(shù)測定。照驗證過的檢查法和檢驗條件進行供試品細菌、霉菌、酵母菌數(shù)檢查能保證檢驗結(jié)果的準確、可靠。
驗證過程中你將會遇到的難點問題
1、藥品中污染的微生物處于不穩(wěn)定狀態(tài)，微生物種類具有不確定性;
2、在藥品生產(chǎn)各個環(huán)節(jié)中, 微生物污染存在著不均勻性;
3、無論是無抑菌性藥物還是抑菌性藥物都要進行微生物限度檢查，特別是污染于抑菌藥物中的微生物在一定條件下可以穩(wěn)定存在一段時間，雖然它們可能受到損傷，但未死亡，如服用至人體內(nèi), 當(dāng)條件適宜時仍可生長繁殖。
4、某些藥物在試驗條件下呈現(xiàn)抑菌作用并干擾待檢菌的檢出或計數(shù), 但當(dāng)服用后受到胃液及腸液的稀釋, 抑菌作用減弱或直接靜脈注射入血液, 細菌便可復(fù)蘇并繁殖, 對人體造成危害。
5、任何一種抑菌藥物均有一定的抑菌范圍，即抗菌譜。相當(dāng)多的抗細菌藥物對真菌毫無作用。對所有菌類均敏感的藥物幾乎不存在。
6、細菌對抑菌藥物有適應(yīng)性，耐藥性致病菌株在臨床上屢見不鮮，所以抑菌藥物內(nèi)是可能存在微生物并可對人體健康造成危害的，因此對抑菌性藥物也有必要進行微生物限度檢查，但抑菌性藥物在檢查過程中會有明顯的抑菌作用，這在很大程度上影響了微生物的檢出。
具備這些驗證條件，如何進行驗證：
1、驗證實驗的設(shè)施、設(shè)備、器具和材料
2、驗證試驗用的稀釋劑( 液) 、沖洗液
3、具抑菌性樣品處理方法
培養(yǎng)基稀釋法：該法一般適合于抑菌作用不是很強的供試品。
化學(xué)試劑中和法
薄膜過濾法該法：常見的檢查方法，適合于可濾過的供試品，特別是無菌檢查。
離心沉淀法：常用于抑菌活性較強而又無法直接過濾的供試品，特別是不溶于水的固體中藥制劑。
驗證步驟：
1、根據(jù)樣品特性，制定檢驗方法和檢驗條件;
2、保證驗證試驗所用的儀器、培養(yǎng)基和試劑等均符合試驗要求;
3、按制定的方法進行試驗;
4、根據(jù)驗證結(jié)果，判斷是否符合驗證的標準。若符合，按驗證的方法和條件進行藥品的微生物限度檢查;若不符合，應(yīng)重新設(shè)立驗證方案，再進行驗證，直至驗證結(jié)果符合設(shè)立的驗證標準。
Tips：驗證時，按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)所規(guī)定的方法及要求進行。對各試驗菌的回收率應(yīng)逐一進行驗證。驗證試驗至少應(yīng)進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。
