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免疫組化中抗體選擇要求
點擊次數(shù)：1969 發(fā)布時間：2009-2-9
1、一抗選擇要點
（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合，就象導(dǎo)彈地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對較低；而多克隆抗體特異性稍弱，抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等有所避免）。
（2）種屬來源。一般家兔來源的抗體多是多克?。欢∈髞碓吹目贵w多是單克隆，但也有另外。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。
（3）實驗?zāi)康氖菣z測什么種屬的抗原，即species reactivity。這一點很重要，一般說明書上都有注明，如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。
（4）能否做免疫組化。一般一抗說明書都會注明做WB、IHC、ICC、IF等，建議選擇注明的抗體，因為一般都是經(jīng)過文章證明。
（5）檢測標(biāo)本類型。用于檢測石蠟切片還是冰凍切片，一般能做石蠟切片的抗體，可能都可以用來檢測冰凍切片，但能做冰凍切片的抗體，不一定能檢測石蠟切片中的抗原。
（6）生產(chǎn)廠家。我的經(jīng)驗是國外抗體生產(chǎn)商原裝抗體質(zhì)量一般沒問題，但有點貴；而國內(nèi)分裝廠家用的一抗工作液，價格便宜，但有時結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差，尤其不同批次重復(fù)性較差。
（7）價格與質(zhì)量的矛盾。我個人認(rèn)為一抗原裝質(zhì)量可能會好點，因為許多一抗避免反復(fù)凍融，且在稀釋液中穩(wěn)定性較差（若時間長），但價格較貴。
2、二抗選擇要點
（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)；而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。這主要與后面有無三抗和三抗種類有關(guān)。
（3）選擇IgM還是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就選擇IgM；反之，一抗是IgG，則二抗選擇IgG。
（4）生產(chǎn)廠家。一般SP三步法我們實驗室選擇中杉金橋的二抗染色試劑盒，內(nèi)含有工作液的二抗，故試驗中只需摸索一抗的濃度即可，效果還可以；而免疫熒光的二抗我一般選擇Jackson ImmnoResearch公司，效果還不錯。