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SSP 3/K/PVC液位開關(guān)現(xiàn)貨供應(yīng)

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SSP 3/K/PVC液位開關(guān)現(xiàn)貨供應(yīng)
液位開關(guān),也稱水位開關(guān),液位傳感器,顧名思義,就是用來控制液位的開關(guān)。從形式上主要分為接觸式和非接觸式。常用的非接觸式開關(guān)有電容式液位開關(guān),接觸式的浮球式液位開關(guān)應(yīng)用較廣泛。電極式液位開關(guān),電子式液位開關(guān),電容式液位開關(guān)也可以采用接觸式方法實(shí)現(xiàn)。

SSP 3/K/PVC液位開關(guān)現(xiàn)貨供應(yīng)

SSP 3/K/PVC液位開關(guān)現(xiàn)貨供應(yīng)

 濟(jì)南友田機(jī)械設(shè)備有限公司,主營各種進(jìn)口工業(yè)機(jī)械設(shè)備及其配件,儀器儀表,實(shí)驗(yàn)室器材,化學(xué)試劑。公司專注于進(jìn)口歐美工業(yè)產(chǎn)品,各種工業(yè)配件,儀器小到工業(yè)用的螺絲,大到幾百公斤重的電機(jī)。公司現(xiàn)在美國,德國,意大利分別設(shè)有辦事處和庫房,采用就近采購原則,節(jié)省了采購成本,從而讓利于客戶,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量和貨期。

 

BTSR RWO.SP.006 BTSR RWO.SP.006 

BTSR CNS.001 BTSR CNS.001 

BTSR SF0.SP.001 BTSR WFO.SP.001 

BTSR M4M8/2000/FE BTSR M4M8/2000/FE 

BTSR TS44/1000/ERW/IP BTSR TS44/1000/ERW/IP

BTSR FEC/100 BTSR FEC/100

parker 991-000616-008

HOERBIGER SVN222BE08PDH  24VDC 16W DB 電磁閥

HOERBIGER SVN222BE12PDH  24VDC 26W DB 電磁閥

ABB JOKAB RT7A  24VDC 0-1.5S 2TLA010028R2000 ABB 2TLA010028R2000  Safety Relay RT7A 1.5s 24DC

GRACO/固瑞克 126695

GRACO/固瑞克 三星12MM-16MM配件 CYLINDER ASSY

GRACO/固瑞克 3/8  DIAMETER - 61-195 D WPR   300 PSI-- --21 bar

GRACO/固瑞克 GP9C使用氣壓0.3-0.6MPa,行程100mm,比壓37:1,

schmersal 101128110 M2S 6610-10-K-Z-2028 Schmersal 101128110  M2S 6610-10-K-Z-2028 6,0M

Schmersal 101128110  M2S 6610-10-K-Z-2028 6,0M

UNIFIL SF610.762.292H13/H.M(610*762*292) 過濾芯 for UNIFIL MS 1MLV40 SN:12526 

UNIFIL V-Q-60-...-0(465*465*48) 過濾芯 for UNIFIL MS 1MLV40 SN:12526 

gwk teco cd 90e compact refridgerator K0502J WECO 09A  335825 

gwk gwk weco 09a Tempering device teco cd90e 冷水機(jī) 

ASEA QGPT 103-A YM 321002-A FR NOM 2KN 張力傳感器 

Haitec-GR 8RV.VS030/9 減速器

Haitec-GR 8MRV030

SIEMENS 6AV1380-0EH10 ,DP通訊電纜

SIEMENS SONAR-BERO,3SG1667-1BJ87,UB,20-30VDC,20-100cm 超聲波傳感器

SIMATIC CPU SR40 6ES7188

SIMATIC CPU SR20

SIMATIC CPU SR30

SIMATIC CPU CR60

SIMATIC SMART 700 IE V3  6AV6 648-0CC11-3AX0 V-J7BD6578 E0-DC-A0-22-77-D8

SIMATIC EM AR02

ELCO PAMM58W10-BF6XXR-4096/8192 "   編碼器Elco PAMM58C10-BF6XXR-4096/8192 Absolut multiturn encoder, Series EAM58, Flange 36

clamping shaft length 20mm, Shaft 10g6mm, 10-30VDC,

Profibus-DP Interface, integrated coupler terminal box

with 3 PG7 threaded connectors, Resolution 4096 /8192"

Baumer IFRM08P13G1...EA2 100925150 001 10-30VDC 5%RW V2.20 Profibus 1-K360°  

LEE PSRA2813350D   芯體

LEE SVDA2811313D   芯體

STALGER 605 000 045 MA210-005 P0-1 BAR     

PROXITRON IKL015.33GH 2319D-15    接近開關(guān)

AKO VF065.03X.33.30LA

AKO VM025.03X.70.30LA

RTFILTER TECHNIK WCI-0450-056-0405-S-N-RT 7600005865 061-056-04056   

Burkert NO.00189519 "  試劑脈沖泵Burkert 00189519 7604-0005-CC-PK-UNFB-024/BR-AC-0000*;JC09+JW0

1"

FRIEDRICHS FILTEYSTEME 5.02.2 0 0 F2 BA FRI.FIL.009  4.222.40.025.2F3L2   Friedrichs  DF 4.222-A40.025.L2.B1-P.RL-5.22-2,0-f3.2,0-Entleerung G1/4 4.222 DN40 PN16; drawing: 4.222-040.001-Z 

e+h FMR50-AAACCABNXZG+AK   液位計Endress+Hauser FMR50-AAACCABNXZG AK

SCHENCK OD-055  

UTILCELL MOD:540 S152277(14) EMAX:10T C:2.1700MV/V MFACT.REG. No:02-M.029    張力傳感器

UTILCELL 54010  Load Cell; Model 540, nominal load 10t

LABOM PASCAL CV CV3100 4-20mA 壓力傳感器

RITTAL SK3110 MAX60℃ 溫度控制器

P+F Pepperl-FuchsRHI58N-OBAK1R61N-04096

CHICODE RCM58D-00302-1024    編碼器

ROTARY ENCODER CHI58SF7-2BM-G5-30F 編碼器

AMCI DC25F-B2C1 KS 編碼器

PROXITRON IKL015.33GH 2319D-15    接近開關(guān)Proxitron IKL 015.33 GH  inductive proximity switch

FRIEDRICHS FILTEYSTEME 5.02.2 0 0 F2 BA FRI.FIL.009  4.222.40.025.2F3L2    

RITTAL SK3110 MAX60℃ 溫度控制器

AUXITROL 32868-3  

KOLLMORGEN CP320260     伺服驅(qū)動器

CONTELEC PD 2203MB   

ELOBAU 207KSH2N,Max20 mA 4-24V ,傳感器

KAMAN DIT5200 -15N

KAMAN DIT5200 20N    電渦流傳感器

DAYTON 6Z084    電機(jī)

waukesha 109284 CFR Octane Numbering Machine Measuring Gauge    CFR辛烷值機(jī)測量塞尺

ULTRANIOLET(UV) TXG015B     熱風(fēng)過濾器鎮(zhèn)流器

DEMKE ELECTRONIC 365A1-27  1844    

SICK TIM310-1030000S02 障礙物傳感器Sick 1062221 TIM310-1030000S02

SICK S30B-2011CA 障礙物傳感器Sick 1026821 S30B-2011CA

SICK 2039248 帶備用密封件和螺栓的鏡罩

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SICK 1026821 S30B-2011CA

SICK 2039248 spare part kit with seal and screw

Sick 1062221 TIM310-1030000S02

簡介

扭力梁式半獨(dú)立后懸架系統(tǒng)發(fā)明于20世紀(jì)70年代,但直到今天這種經(jīng)典結(jié)構(gòu)仍然有著強(qiáng)大的生命力,被廣泛用于前輪驅(qū)動的中小型家庭轎車的后懸架系統(tǒng)中。雖然在近40年的發(fā)展中,各大汽車廠商對扭力梁式半獨(dú)立懸架進(jìn)行著不斷地升級和優(yōu)化,但其主要構(gòu)成仍舊由4部份組成:用于承受主要垂向和側(cè)向力矩扭轉(zhuǎn)橫梁;焊接在扭轉(zhuǎn)橫梁左右兩側(cè)的縱向擺臂;布置于縱向擺臂前端用于連接車身的彈性元件及連接支架;彈簧減振器系統(tǒng)。

扭力梁式半獨(dú)立后懸架系統(tǒng)具有以下優(yōu)點(diǎn):懸架結(jié)構(gòu)簡單,重量輕;在整車裝配時,無須后輪定位,減少裝配工時;占用空間小,容易獲得較大的尾部空間;彈簧減振器系統(tǒng)便于匹配布置;有利于控制車輪相對于彈簧減振的運(yùn)動比率;扭轉(zhuǎn)橫梁特性可以替代穩(wěn)定桿的功用;懸架運(yùn)動過程中,前束和輪距變化微?。粋?cè)向力工況下,外傾角變較?。恢本€穩(wěn)定性好,后輪胎損耗小;通過的合理設(shè)定彈性襯套的特性,可降低制動點(diǎn)頭。

但是半獨(dú)立式結(jié)構(gòu)的懸架系統(tǒng)也有以下不利因素:扭轉(zhuǎn)橫梁產(chǎn)生扭轉(zhuǎn)應(yīng)力和剪切應(yīng)力,在焊接連接處有較高應(yīng)力,允許后軸承受的載荷受到扭力梁強(qiáng)度的限制;為保證行駛穩(wěn)定性,兩側(cè)縱向擺臂彈性襯套連點(diǎn)受力復(fù)雜;兩側(cè)車輪相互影響;舒適性差。

工作原理

工作原理是將非獨(dú)立懸掛的車輪裝在一根整體車軸的兩端,這樣當(dāng)一邊車輪運(yùn)轉(zhuǎn)跳動時,就會影響另一側(cè)車輪也作出相應(yīng)的跳動,使整個車身振動或傾斜。

特點(diǎn)

采取這種懸掛系統(tǒng)的汽車一般平穩(wěn)性和舒適性較差,但由于其構(gòu)造較簡單,承載力大,該懸掛多用于載重汽車、普通客車和一些其他特種車輛上。

分類

1、非獨(dú)立式懸掛:兩側(cè)車輪安裝于一根整體式車橋上,車橋通過懸掛與車架相連。這種懸掛結(jié)構(gòu)簡單,傳力可靠,但兩輪受沖擊震動時互相影響。而且由于非獨(dú)立式懸掛質(zhì)量較重,懸掛的緩沖性能較差,行駛時汽車振動,沖擊較大。該懸掛一般多用于載重汽車、普通客車和一些其他車輛上。

2、獨(dú)立式懸掛:每個車輪單獨(dú)通過一套懸掛安裝于車身或者車橋上,車橋采用斷開式,中間一段固定于車架或者車身上;此種懸掛兩邊車輪受沖擊時互不影響,而且由于非懸掛質(zhì)量較輕;緩沖與減震能力很強(qiáng),乘坐舒適。各項(xiàng)指標(biāo)都優(yōu)于非獨(dú)立式懸掛,但該懸掛結(jié)構(gòu)復(fù)雜,而且還會使驅(qū)動橋、轉(zhuǎn)向系變得復(fù)雜起來。采用此種懸掛的有下面兩大類車輛。

①轎車、客車及載人車輛。可明顯提高乘坐舒適性,并且在高速行駛時提高汽車的行駛穩(wěn)定性。

②越野車輛、車輛和礦山車輛。在壞路和無路的情況下,可保證全部車輪與地面的接觸,提高汽車的行駛穩(wěn)定性和附著性,發(fā)揮汽車的行駛速度。

3、空氣懸掛:利用空氣彈簧內(nèi)密閉氣體受壓縮后的剛性遞增性,也就是隨著空氣彈簧不斷被壓縮,其剛度逐漸增加,同時,其內(nèi)部氣體隨空氣彈簧被壓縮或拉長而壓入或排出,導(dǎo)致空氣懸架系統(tǒng)具有接近理想的動態(tài)彈性特性。該懸掛由于成本非常高,所以一般用于豪華車上(越野車、SUV用的比較多),市面上采用此懸掛的車一般都在三四十萬以上。

分光光度計,又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復(fù)雜的光,分解為光譜線的科學(xué)儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

中文名

分光光度計

外文名

spectrophotometer

組    成

光源、單色器、樣品室、檢測器

特    點(diǎn)

雙光路、雙光束光學(xué)系統(tǒng)

波    長

380~780 nm

入射光等于

反射 + 分散 + 吸收 + 透過

透射比準(zhǔn)確度

≤±1nmT

目錄

  1. 1 簡介
  2. ? 概述
  3. ? 儀器組成
  4. ? 光譜范圍
  1. ? 原理
  2. ? 儀器特點(diǎn)
  3. ? 儀器指標(biāo)
  4. ? 常見用途
  1. 2 相關(guān)資料
  2. ? 操作方法
  3. ? 維護(hù)保養(yǎng)

簡介

編輯

概述

分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū),(2)380~780nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進(jìn)行校正檢定。

儀器組成

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

光譜范圍

包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~400 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400~760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍(lán)靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

分光光度計圖片

分光光度計圖片(4張)

氫燈(或氘燈)的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185~400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計的光源。

物質(zhì)的吸收光譜:

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。

不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)。

當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時透過的光的強(qiáng)度減弱,因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?,一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過溶液。

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光。

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:

入射光 = 吸收光 十 透過光

原理

分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時,被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關(guān)系如下式:

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度;

I0為入射的單色光強(qiáng)度;

I 為透射的單色光強(qiáng)度;

T 為物質(zhì)的透射率;

k 為摩爾吸收系數(shù);

L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長;

c 為物質(zhì)的濃度;

物質(zhì)對光的選擇性吸收波長,以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r操作。

儀器特點(diǎn)


  *的雙光路、雙光束光學(xué)系統(tǒng),儀器分辨率更高,雜散光更低,穩(wěn)定性、可靠性更強(qiáng),分析更加準(zhǔn)確;
  采用320*240位點(diǎn)陣式高亮6 ”液晶顯示器,顯示清晰,信息完備;
  *的長光程光路設(shè)計,使儀器分辨率更高,尤其適合微量測試 強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能,使測試結(jié)果能得到充分的應(yīng)用,用戶編輯更為簡單快捷;
  采用懸架式光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計,整體光路獨(dú)立固定在16mm厚的鋁制無變形基座上,底板的變形和外界的震動對光學(xué)系統(tǒng)不產(chǎn)生任何影響,從而大大提高了儀器的穩(wěn)定性和可靠性;
  采用同步正弦機(jī)構(gòu),波長準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好;
  采用ARM系統(tǒng);
  0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六檔光譜帶寬自動可選,滿足不同用戶的測量需求;
  24位高速、高精度A/D轉(zhuǎn)換,儀器精度更高、反應(yīng)速度更快;
  主要元件采用進(jìn)口配置,使儀器雜散光更低、穩(wěn)定性、可靠性更強(qiáng);
  功能更加強(qiáng)大,主機(jī)可獨(dú)立完成光度測量、定量測量、光譜掃描、動力學(xué)、DNA/蛋白質(zhì)測試,多波長測試及數(shù)據(jù)打印等功能;
  充分考慮不同用戶的使用習(xí)慣,本系列儀器都標(biāo)配元析公司光譜掃描軟件,聯(lián)機(jī)操作時,除能實(shí)現(xiàn)主機(jī)的所有測試功能外,還可實(shí)現(xiàn)更為強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能,并且使數(shù)據(jù)存儲達(dá)到無限。

儀器指標(biāo)

型號UV-9000波長范圍190-900nm;光譜帶寬0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0nm六檔可選波長,準(zhǔn)確度±0.1nm(D2 656.1nm)、 ±0.3nm;全區(qū)域波長重復(fù)性≤0.1nm。

光度準(zhǔn)確度:±0.2%T

光度重復(fù)性:≤0.1%T

雜散光:≤0.01%T

穩(wěn)定性:±0.0004A/h(500nm處)

基線平直度:±0.001A

噪聲水平: ±0.0004A/h

光度范圍:0-200%T

電源:AC 220V/50Hz或110V/60Hz

重量:30kg

技術(shù)參數(shù):

波長范圍:320∽1000nm

光譜帶寬:4nm

雜散光:≤0.5%(在360nm處)

波長準(zhǔn)確度:優(yōu)于±2nm

透射比準(zhǔn)確度:≤±1nmT

常見用途

核酸的定量

核酸的定量是分光光度計使用頻率高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。

事實(shí)上,分光光度計的設(shè)計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化,即儀器有一定的準(zhǔn)確度和精確度。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動,都是正常的。另外,還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時,離子濃度太高,也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移如TE,可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了減少顆粒對測試結(jié)果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值好在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇*;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的小體積等多個操作事項(xiàng)。

除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,*等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品,A320一般是0。

蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)

這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的換算方法,將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì),一般要消除320nm 的“背景”信息,設(shè)定此功能“開”。與測試核酸類似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,佳的線性范圍在1.0-1.5 之間。實(shí)驗(yàn)中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時,發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實(shí)上,只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%,表明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因?yàn)閃arburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數(shù),只要吸光值有少許改變,濃度就會被放大,從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。

比色法蛋白質(zhì)定量

蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的混合物,比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如*,*)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。

比色方法

一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。

Lowry 法:以早期的Biuret 反應(yīng)為基礎(chǔ),并有所改進(jìn)。蛋白質(zhì)與Cu2 反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)色的反應(yīng)物。但是與Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺點(diǎn)是需要順序加入幾種不同的反應(yīng)試劑;反應(yīng)需要的時間較長;容易受到非蛋白物質(zhì)的影響;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物質(zhì)的蛋白不適合此種方法。

BCA(Bicinchoninine acid assay)法:這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2 反應(yīng)產(chǎn)生Cu ,后者與BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關(guān)系較強(qiáng),反應(yīng)后形成的化合物非常穩(wěn)定。相對于Lowry法,操作簡單,敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質(zhì)之間以及去污劑的干擾。

Bradford 法:這種方法的原理是蛋白質(zhì)與考馬斯亮蘭結(jié)合反應(yīng),產(chǎn)生的有色化合物吸收峰595nm。其大的特點(diǎn)是,敏感度好,是Lowry 和BCA 兩種測試方法的2 倍;操作更簡單,速度更快;只需要一種反應(yīng)試劑;化合物可以穩(wěn)定1小時,方便結(jié)果;而且與一系列干擾Lowry,BCA 反應(yīng)的還原劑(如DTT,巰基乙醇)相容。但是對于去污劑依然是敏感的。主要的缺點(diǎn)是不同的標(biāo)準(zhǔn)品會導(dǎo)致同一樣品的結(jié)果差異較大,無可比性。

某些初次接觸比色法測定的研究者可能為各種比色法測出的結(jié)果并不*,感到迷惑,究竟該相信哪種方法?由于各種方法反應(yīng)的基團(tuán)以及顯色基團(tuán)不一,所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。例如:Keller等測試人奶中的蛋白,結(jié)果Lowry,BCA 測出的濃度明顯高于Bradford,差異顯著。即使是測定同一樣品,同一種比色法選擇的標(biāo)準(zhǔn)樣品不*,測試后的濃度也不*。如用Lowry測試細(xì)胞勻漿中的蛋白質(zhì),以BSA作標(biāo)準(zhǔn)品,濃度1.34mg/ml,以a球蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品,濃度2.64mg/ml。因此,在選擇比色法之前,是參照要測試的樣本的化學(xué)構(gòu)成,尋找化學(xué)構(gòu)成類似的標(biāo)準(zhǔn)蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品。另外,比色法定量蛋白質(zhì),經(jīng)常出現(xiàn)的問題是樣品的吸光值太低,導(dǎo)致測出的樣品濃度與實(shí)際的濃度差距較大。關(guān)鍵問題是,反應(yīng)后1011分光光度計的重要配件—— 比色杯的顏色是有一定的半衰期,所以每種比色法都列出了反應(yīng)測試時間,所有的樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)樣品),都必須在此時間內(nèi)測試。時間過長,得到的吸光值變小,換算的濃度值降低。除此,反應(yīng)溫度、溶液PH值等都是影響實(shí)驗(yàn)的重要原因。此外,非常重要的是,是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材質(zhì)的比色杯,因?yàn)榉磻?yīng)后的顏色會讓石英或者玻璃著色,導(dǎo)致樣品吸光值不準(zhǔn)確。

細(xì)菌細(xì)胞密度(OD 600)

實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長密度和生*,多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測推斷細(xì)菌的生長密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn),需要采用分光光度計準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液,之后定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。為了保證正確操作,必須針對每種微生物和每臺儀器用顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),做出校正曲線。實(shí)驗(yàn)中偶爾會出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負(fù)值,原因是采用了顯色的培養(yǎng)基,即細(xì)菌培養(yǎng)一段時間后,與培養(yǎng)基反應(yīng),發(fā)生變色反應(yīng)。另外,需要注意的是,測試的樣品不能離心,保持細(xì)菌懸浮狀態(tài)。

分光光度計的重要配件—— 比色杯

比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據(jù)不同的測量體積,有比色杯和毛細(xì)比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測定。因?yàn)榉磻?yīng)中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色,所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內(nèi)測試樣品。

由于另外測試的樣品量不同,所以一般分光光度計廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。市場已經(jīng)存在一種既可用于核酸、紫外蛋白質(zhì)定量,亦可用于蛋白比色法測定的塑料杯,樣品用量僅需50μl,比色杯單個無菌包裝,可以回收樣品。如Eppendorf UVette&reg;塑料比色杯,是比色杯市場上一個革新。隨著生命科學(xué)以及相關(guān)學(xué)科發(fā)展,對此類科學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究提出更高的要求,分光光度計將是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室*的儀器,也成為微生物、食品、制藥等相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的*設(shè)備之一。

隨著科技的發(fā)展,比色杯已經(jīng)不是使用分光光度計時的*物品。國外Nanodrop公司(現(xiàn)已被Thermo Fisher公司收購)生產(chǎn)的ND1000分光光度計與舊式分光光度計相比,已經(jīng)可以做到無需稀釋樣品,無需使用比色杯,每次測量僅需1-2μl樣品即可完成測量。

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