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DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒(20×)使用說明書 

【產(chǎn)品組成】

【保存條件】

 —20℃,避光,12個(gè)月

【產(chǎn)品概述】

  DAB辣根過氧化物酶顯色液(DABHorseradishPeroxidaseColorDevelopmentKit)是一種依據(jù)辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合顯色，用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜顯色的試劑盒。DAB即3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride,是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶的催化下,DAB會(huì)產(chǎn)生棕色沉淀，該棕色沉淀丌溶于水和乙醇。因此在DAB顯色后,還可以使用溶于乙醇的染料進(jìn)行后續(xù)染色。

  本顯色液可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時(shí)結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色，也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色。

【使用方法】

1、常規(guī)組織切片、細(xì)胞樣品、膜不辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3～5次，每次3～5min。對(duì)于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也可用洗滌液洗滌3～5次，每次3～5min。

2、按(A):試劑(B):蒸餾水=1:1:18的比例混合,即為DAB染色工作液，即配即用。

3、洗滌過組織后，去除洗滌液，加入適量DAB染色工作液，確保覆蓋樣品。

4、室溫避光孵育30min或更長時(shí)間，直至顯色至預(yù)期深淺。

5、去除DAB染色工作液，用蒸餾水清洗1～2次即可終止顯色反應(yīng)。

6、對(duì)組織切片或細(xì)胞樣品，反應(yīng)終止后，如有必要可用中性紅染色液染色，便于觀察。對(duì)于膜染色，反終止后可室溫晾干避光保存。

【常見問題及可能原因】

1、背景顯色太深

①在免疫組化時(shí)如果背景顯色太深，考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進(jìn)行封閉。也應(yīng)請(qǐng)注意選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

②在進(jìn)行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時(shí)，如果背景顯色太深，需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶?？梢栽?體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫，混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。

③可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗?jié)舛取?/span>

④選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液，或延長洗滌時(shí)間。

2、沒有顯色或顯色太弱

①當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被a正常顯色。

②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用*檢測體系。

③適當(dāng)延長顯色時(shí)間，另外確定抗原修復(fù)是否對(duì)于使用的一抗是必需的。

【注意事項(xiàng)】

1、DAB是致癌物，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2、試劑(A)、試劑(B)避免反復(fù)凍融。

2、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。