【產(chǎn)品用途】

　　嘔吐毒素(DON)免疫親和柱適合于和DON酶免分析試劑盒、HPLC或液質(zhì)結(jié)合使用，定量檢測(cè)DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理，提高了樣品的純度，純化后的提取液可用不同的分析方法測(cè)定。

　　【測(cè)定原理】

　　本產(chǎn)品測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，嘔吐毒素(DON)單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，DON與抗體結(jié)合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。后采用甲醇洗脫DON，然后進(jìn)行相關(guān)分析。

　　【樣品制備及凈化】

　　----準(zhǔn)確稱取25.0g粉碎的樣品，加入5g聚乙二醇8000，并與125mL水混合，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min，

　　----用快速定性濾紙過濾，并用玻璃微纖維濾紙過濾，至濾液澄清，備用。

　　【親和柱凈化】

　　注意：整個(gè)純化過程盡量不要讓柱子干燥!

　　----將柱子上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上;

　　----將20mL注射器連接于免疫親和柱上部，用5~10mL pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)或者去離子水平衡柱子，以1滴/秒的速度緩慢通過免疫親和柱，(用注射器加以正壓或用真空泵施加負(fù)壓，也可以使用泵流操作架配合免疫親和柱);

　　----準(zhǔn)確移取2mL上述濾液(相當(dāng)于0.4g樣品)注入注射器中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以1滴/2秒的速度緩慢通過免疫親和柱;

　　----用20mL 水沖洗柱子，棄去流出液，流速1滴/秒，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體;

　　----準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體。收集全部洗脫液，可根據(jù)實(shí)際測(cè)定條件進(jìn)行稀釋或氮?dú)獯蹈珊罅鲃?dòng)相定容，再進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。

　　【注意事項(xiàng)】

　　(1)嘔吐毒素對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。

　　(2)不要使用過有效期的免疫親和柱。

　　(3)免疫親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。

　　(4)使用前，免疫親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。

　　(5)HPLC液相測(cè)定值、試劑盒計(jì)算值接近zui高檢出值時(shí)，樣本的實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿，建議減少上樣體積重新過柱。

　　(6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整，建議低不少于10g樣。

　　溫馨提示：不可用于臨床治療。