【產(chǎn)品用途】

　　脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(又稱嘔吐毒素，簡(jiǎn)稱DON)免疫親和柱適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結(jié)合使用，定量檢測(cè)DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理，提高了樣品的純度，純化后的提取液可用不同的分析方法測(cè)定。

　　【測(cè)定原理】

　　上海飛測(cè)嘔吐毒素免疫親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，DON與抗體結(jié)合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。后采用甲醇洗脫DON，然后進(jìn)行相關(guān)分析。

　　【所需材料】(不提供)

　　(1)設(shè)備及器皿耗材：天平、粉碎機(jī)、離心機(jī)、渦旋混勻儀或搖床(轉(zhuǎn)速≥200r/min);量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器(100μL~1000μL)、快速定性濾紙、玻璃微纖維濾紙(whatman934-AH，直徑11cm，孔徑1.5μm)、20mL玻璃注射器等。

　　(2)試劑：甲醇(色譜級(jí))、聚乙二醇8000(PEG)、蒸餾水或去離子水。

　　【試劑配制】

　　0.1%吐溫20-PBS溶液：將0.1%吐溫20-PBS粉末(廠家提供)直接用900mL水全部溶解后，用HCl或NaOH調(diào)pH至7.4，后用水定容至1L。

　　5M NaOH溶液：稱取20g NaOH，溶于100mL水中。

　　【樣品制備】

　　----準(zhǔn)確稱取25g(精確至0.01g)粉碎的樣品，加入5g聚乙二醇8000，并與125mL水混合，搖床振蕩提取15min;

　　----用快速定性濾紙過濾或4000r/min，離心5min;對(duì)于pH低于6.0的玉米加工副產(chǎn)物及飼料等的濾液或上清液，需要用5M NaOH調(diào)pH至7.0左右，并用玻璃微纖維濾紙過濾，至濾液澄清，備用;

　　----準(zhǔn)確移取2.5mL混勻?yàn)V液(相當(dāng)于0.5g樣品)過親和柱。

　　【親和柱凈化】

　　注意：整個(gè)純化過程盡量不要讓柱子干燥!

　　----3mL柱管取出上方堵頭，減去上堵頭螺紋下突出部分，插回柱子上，另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上(柱管內(nèi)偶見有小氣泡屬正?，F(xiàn)象，不影響親和柱的使用);

　　----準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液，注入針筒中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;

　　----用20mL 水沖洗柱子(對(duì)于飼料及玉米加工副產(chǎn)品等顏色較深的樣液，先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗，再用10 mL 10%甲醇-水沖洗柱子，后用10mL水沖洗柱子。)，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體;

　　----準(zhǔn)確加入1.5mL甲醇(色譜級(jí))洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體。收集全部洗脫液，進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。

　　【檢測(cè)方法】

　　IAC-HPLC法檢測(cè)

　　----過有機(jī)濾膜(孔徑0.22μm)后，直接HPLC測(cè)定;或在50℃下用氮?dú)饩従彽卮抵两?，加入流?dòng)相混勻，過有機(jī)濾膜(孔徑0.22μm)后，參照GB 5009.111-2016或GB/T 30956-2014條件進(jìn)行HPLC測(cè)定。

　　【注意事項(xiàng)】

　　(1)嘔吐毒素對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。

　　(2)不要使用過有效期的免疫親和柱。

　　(3)免疫親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。

　　(4)使用前，免疫親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。

　　(5)HPLC液相測(cè)定值、試劑盒計(jì)算值接近zui高檢出值時(shí)，樣本的實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿，建議減少上樣體積重新過柱。

　　(6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整，建議低不少于10g樣。

　　【保質(zhì)期】

　　有效期為12個(gè)月。

　　生產(chǎn)日期見包裝盒。