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（一）利用分子大小
1、透析：原理：利用蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)和其他小分子物質(zhì)如無機(jī)鹽、單糖、水等分開。
方法：將待提純蛋白質(zhì)放在透析袋中放在蒸餾水中進(jìn)行
涉及的問題：
如何加快透析過程
（1） 加大濃度差，及時(shí)更換透析液
（2） 利用磁力攪拌器
常用的半透膜：玻璃紙、火棉和其他材料合成
2、超過濾：原理：利用壓力和離心力，強(qiáng)行使其他小分子和水通過半透膜，而蛋白質(zhì)留在膜上
3、凝膠過濾層析：原理：當(dāng)不同分子大小的蛋白質(zhì)混合物流進(jìn)凝膠層析柱時(shí)，比凝膠網(wǎng)孔大的分子不能進(jìn)入珠內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，排阻在凝膠珠以外，在凝膠珠縫隙間隙中向下移動。而比孔小的分子不同程度地進(jìn)入凝膠珠內(nèi)，這樣由于不同大小分子所經(jīng)歷的路徑不同而到分離。
結(jié)果：大分子先被洗脫下來，小分子后被洗脫下來
（二）利用溶解度差別
4、等電點(diǎn)沉淀：原理：不同蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合物調(diào)到其中一種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，這種蛋白質(zhì)大部分和全部被沉淀下來.。
5、鹽析與鹽溶 ：原理：低濃度時(shí)，中性鹽可以增加蛋白質(zhì)溶解度這種現(xiàn)象稱為鹽溶.當(dāng)離子強(qiáng)度增加，足夠高時(shí)，例如飽和或半飽和程度，很多蛋白質(zhì)可以從水中沉淀出來，這種現(xiàn)象稱為鹽析
（三）根據(jù)電荷不同
6、SDS-PAGE 全稱 十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳
原理：通過加熱和SDS可以使蛋白質(zhì)變性，多亞基的蛋白質(zhì)也解離為單亞基，處理后的樣品中肽鏈?zhǔn)翘幱跓o二硫鍵連接的，分離的狀態(tài)。電泳時(shí)SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物在凝膠中的遷移率不再受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響，而主要取決于蛋白質(zhì)分子量。所以SDS-PAGE常用來分析蛋白質(zhì)的純度和大致測定蛋白質(zhì)的分子量。
7、離子交換層析：原理：氨基酸分離常用陽離子交換樹脂，樹脂被處理成鈉型，將混合氨基酸上柱，氨基酸主要以陽離子形式存在，在樹脂上與鈉離子發(fā)生交換，而被掛在樹脂上。
氨基酸在樹脂上結(jié)合的牢固程度取決于氨基酸與樹脂之間的親和力，決定親和力的因素有：（1）主要是靜電吸引力 （2）氨基酸側(cè)鏈同樹脂之間的疏水作用
氨基酸與陽離子交換樹脂間的靜電引力大小次序依次是：
堿性氨基酸R2+>中性氨基酸R+>酸性氨基酸R0。
因此洗脫順序應(yīng)該是：
酸性氨基酸　中性氨基酸　堿性氨基酸
為使氨基酸從樹脂上洗脫下來采用逐步提高pH和鹽濃度的方法