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菌落總數(shù)測(cè)試片

一、適用范圍

二、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作及操作中的注意事項(xiàng)

三、生活飲用水微生物常規(guī)指標(biāo)及限值

四、檢測(cè)流程圖

五、菌落總數(shù)測(cè)試片使用說(shuō)明

六、飲用水大腸菌群檢驗(yàn)紙片使用說(shuō)明

七、水質(zhì)大腸菌群檢驗(yàn)紙片使用說(shuō)明

八、大腸菌群檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明

九、大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片使用說(shuō)明

十、致病菌檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明

十一、沙門氏菌測(cè)試片使用說(shuō)明

十二、金黃色葡萄球菌測(cè)試片使用說(shuō)明

十三、副溶血弧菌測(cè)試片使用說(shuō)明

十四、大腸桿菌O157測(cè)試片使用說(shuō)明

十五、阪崎腸桿菌測(cè)試片使用說(shuō)明

十六、蠟樣芽胞桿菌測(cè)試片使用說(shuō)明

一、適用范圍

適用于生活飲用水及其水源水生指標(biāo)菌與致病菌的日常監(jiān)測(cè)以及應(yīng)急檢測(cè)需要。

二、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作及操作中的注意事項(xiàng)

1 開(kāi)展微生物快速檢測(cè)所需的基本條件

1.1 一間通風(fēng)良好、面積不需要很大的獨(dú)立房間，房間里備有紫外線消毒燈，洗手盆，實(shí)驗(yàn)臺(tái)。應(yīng)急檢測(cè)時(shí)，臨時(shí)性的房間應(yīng)注意工作環(huán)境的的消毒（如采用84消毒液消毒等），并備好酒精燈。

1.2 一臺(tái)高壓鍋或紅外線消毒柜（家用消毒碗柜也可。）應(yīng)急檢測(cè)時(shí)，應(yīng)備好消毒液，含氯消毒液的濃度在250ppm時(shí)，器皿消毒應(yīng)保持5分鐘以上。

1.3 一臺(tái)小型恒溫培養(yǎng)箱；

1.4 有條件時(shí)，配備一臺(tái)普通冰箱，用于存放樣品；

1.5 水質(zhì)微生物采樣檢測(cè)箱，箱內(nèi)備有采樣用具與實(shí)驗(yàn)用的一些工具和器皿；

1.6 檢測(cè)用試紙與試劑盒。

2 移液器的消毒

2.1 移液器管頭的消毒：將管頭放入錫箔袋或用錫箔紙包好，放入民用紅外線消毒柜中消毒；或?qū)⒐茴^放入消毒液中浸泡，取用時(shí)注意甩干消毒液并用無(wú)菌生理鹽水沖洗三次。

3. 無(wú)菌操作和注意事項(xiàng)

3.1點(diǎn)燃酒精燈，營(yíng)造局部無(wú)菌環(huán)境。取樣和加樣時(shí)盡量靠近酒精燈操作。能用火焰消毒的操作工具如鑷子、剪子、長(zhǎng)柄勺、小刀等應(yīng)在酒精燈上消毒后使用。

3.2 用75%酒精棉球?qū)⑹帜ú料尽?/span>

3.3 廢棄物及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

三、生活飲用水微生物常規(guī)指標(biāo)及限值

根據(jù)國(guó)家生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB 5749—2006），常規(guī)的微生物指標(biāo)及限值如下：

指標(biāo)	限值
菌落總數(shù)（CFU/mL）	100
總大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）	不得檢出
耐熱大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）	不得檢出
大腸埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）	不得檢出

MPN表示zui可能數(shù)；CFU表示菌落形成單位。當(dāng)水樣檢出總大腸菌群時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步檢驗(yàn)大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群；水樣未檢出總大腸菌群，不必檢驗(yàn)大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群。

四、檢測(cè)流程圖

接種于菌落

總數(shù)測(cè)試片

接種于大腸菌群檢驗(yàn)紙片

或大腸菌群檢測(cè)試劑盒

接種于致病菌檢測(cè)

試劑盒

36℃±1℃培養(yǎng)15-24h

觀察計(jì)數(shù)

報(bào)告

全部為

紫藍(lán)色

紙片有黃色斑點(diǎn)

或試劑盒產(chǎn)酸產(chǎn)氣

總大腸菌

群陰性

接種于耐熱大腸菌

大腸埃希氏菌測(cè)試片

水樣（ 生活飲用水或水源水）

36℃±1℃培養(yǎng)18h

全部

澄清

一格或多

格混濁

陰性

結(jié)果

接種于對(duì)

應(yīng)測(cè)試片

報(bào)告

44.5℃培養(yǎng)15-24h

報(bào)告

36℃培養(yǎng)

18h

有紅色或

紫藍(lán)色菌斑

有紫藍(lán)

色菌斑

沒(méi)有

菌斑

觀察

結(jié)果

耐熱大腸

菌群陽(yáng)性

耐熱大腸菌群和

大腸埃希氏菌陰性

埃希氏

菌陽(yáng)性

報(bào)告

五、菌落總數(shù)測(cè)試片使用說(shuō)明

1 原理及適用范圍：菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的檢測(cè)項(xiàng)目指標(biāo)。菌落總數(shù)測(cè)試片（Aerobic Count Plates BB202）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑——氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測(cè)試片上呈紫紅色或粉紅色，這樣可縮短計(jì)數(shù)時(shí)間和增強(qiáng)計(jì)數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于食品及水中菌落總數(shù)的測(cè)定，也可用于與食品接觸的容器操作臺(tái)和其他設(shè)備表面的衛(wèi)生檢測(cè)。

2 樣品處理與稀釋

2.1 生活飲用水：取充分混勻的水樣（原液）檢測(cè)。

2.2 水源水：以無(wú)菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。

2.3 食品：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，充分混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。

3 接種：將菌落總數(shù)測(cè)試片（BB202）置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜準(zhǔn)備接種。生活飲用水、純水和礦泉水取原液，每個(gè)樣品做兩片；水源水以及食品選擇2～3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)稀釋度同時(shí)應(yīng)做一平行接種。以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL混勻的樣品液，慢慢均勻地滴加到測(cè)試片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每次檢測(cè)，同時(shí)將1mL滅菌生理鹽水滴加到另一片測(cè)試片上作為空白對(duì)照。

4 培養(yǎng)： 將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過(guò)12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

5 結(jié)果判讀: 細(xì)菌在測(cè)試片上生長(zhǎng)后會(huì)顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數(shù)適中（10～100個(gè)）的測(cè)試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。作菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用眼睛直接觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各測(cè)試片菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算時(shí)用。

6 計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式

6.1通常選擇菌落在10～100個(gè)之間的測(cè)試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例1）。

6.2若有兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)在10～100個(gè)之內(nèi)，兩者的比值小于2，則取其平均數(shù)，若大于2，則用值小者（見(jiàn)表1實(shí)例2、例3）。

6.3若三個(gè)稀釋度的菌落數(shù)都有在10～100個(gè)之內(nèi)，應(yīng)選擇二個(gè)低數(shù)值的平均數(shù)（見(jiàn)表1實(shí)例4）。

6.4若三個(gè)稀釋度的菌落數(shù)均小于10個(gè)或大于100個(gè)時(shí)，應(yīng)重新試用更低或更高的稀釋度進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)；或采用均小于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui小值，或采用均大于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui大值（見(jiàn)表1實(shí)例5、例6）。

6.5若所有稀釋度的測(cè)試片均無(wú)生長(zhǎng)，以未檢出報(bào)告之。菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采樣兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來(lái)表示。

表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式

實(shí)例	稀釋度			兩稀釋度之比	選定計(jì)數(shù) 稀釋度	報(bào)告方式（個(gè)/g或個(gè)/mL）
	10^-1	10^-2	10^-3
1 2 3 4 5 6	158 208 265 98 8 295	76 68 82 50 5 174	5 12 50 15 1 106	— 1.8 6.1 — — —	10^-2 10^-2、10^-3 10^-2 10^-1、10^-2 10^-1 10^-3	7.6×10³ 9.4×10³ 8.2×10³ 3.0×10³ 8.0×10 1.1×10⁵

7 表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測(cè)試片上，靜置至少1h使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測(cè)物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

六、飲用水大腸菌群檢驗(yàn)紙片使用說(shuō)明（五管法）

1 適用范圍：適用于飲用水中總大腸菌群的快速檢驗(yàn)。

2 方法原理：將乳糖、顯色劑和選擇性培養(yǎng)基加載在紙片上，經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長(zhǎng)并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽(yáng)性，記錄每個(gè)稀釋度大腸菌群陽(yáng)性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。

3操作方法

3.1用滅菌吸管吸取10mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中，均勻涂布，共做5個(gè)重復(fù)；

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

3.3觀察每片顏色變化，若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為大腸菌群陽(yáng)性。

3.4根據(jù)陽(yáng)性反應(yīng)紙片數(shù)，查MPN表得出水樣中總大腸菌群的MPN值（見(jiàn)表2）。如所有紙片均為陰性時(shí)，可報(bào)告總大腸菌群未檢出。

3.5 對(duì)于陽(yáng)性紙片，應(yīng)進(jìn)一步檢驗(yàn)大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群。用無(wú)菌鑷子在陽(yáng)性菌斑處挑取少許帶菌濾紙，用3mL無(wú)菌水混勻，接種到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片上，進(jìn)行44.5℃培養(yǎng)和檢驗(yàn)。

表2 用5份10mL水樣時(shí)各種陽(yáng)性和陰性結(jié)果組合時(shí)的zui可能數(shù)（MPN）

陽(yáng)性管或紙片數(shù)	總大腸菌群數(shù)（MPN/100mL）
0	0或﹤2.2
1	2.2
2	5.1
3	9.2
4	16.0
5	>16

七、水質(zhì)大腸菌群檢驗(yàn)紙片使用說(shuō)明（十五管法）

1 適用范圍：適用于水源水中總大腸菌群的快速檢驗(yàn)。

3操作方法

3.1 用滅菌吸管吸取10mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中，均勻涂布，共做5個(gè)重復(fù)；分別取1mL水樣加到小紙片中，共接5個(gè)重復(fù)；另取1mL水樣加到9mL無(wú)菌水中混勻，用1mL滅菌吸管分別吸取1mL（即0.1mL水樣）,加到zui后5片小紙片中。

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

3.3 觀察每片顏色變化，若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為陽(yáng)性。

3.4 根據(jù)每個(gè)稀釋度的陽(yáng)性反應(yīng)紙片數(shù)，查MPN表（表3）可得出水樣中總大腸菌群的MPN值。

八、總大腸菌群檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明

1.適用范圍：適用于二次供水、自來(lái)水、水源水、生活飲用水、礦泉水等樣品中總大腸菌群檢測(cè)。對(duì)污染較嚴(yán)重的樣品采用十五管法，其它可采用五管檢測(cè)法。

2.方法原理：與國(guó)標(biāo)法相同。事先將乳糖蛋白胨培養(yǎng)基雙料、乳糖蛋白胨培養(yǎng)基單料濃縮至試劑盒培養(yǎng)孔中，隨時(shí)取用。

3.操作方法：

3.1十五管法：用無(wú)菌吸管吸取5個(gè)10mL水樣分別加入到試劑盒1號(hào)～5號(hào)5個(gè)大發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。吸取5個(gè)1mL水樣分別加入到試劑盒7號(hào)～11號(hào)5個(gè)小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。吸取5個(gè)用滅菌生理鹽水稀釋后的1:10稀釋液1mL加入到試劑盒12號(hào)～16號(hào)小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。余孔可做對(duì)照。

3.2 五管法: 用無(wú)菌吸管吸取5個(gè)10mL水樣分別加入到試劑盒1號(hào)～5號(hào)5個(gè)大發(fā)酵培養(yǎng)基管（孔）內(nèi)。余孔可做對(duì)照。

3.3 排氣泡:加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時(shí)可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)次排出氣泡。

3.4 培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒置36℃± 1℃溫箱中，培養(yǎng)18h～24h。

3.5 觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽(yáng)性結(jié)果，可根據(jù)試劑盒的陽(yáng)性管數(shù),參照國(guó)標(biāo)GB/T5750.12-2006的方法，查表 MPN檢索表（表2或表3），報(bào)告每100mL水樣中的總大腸菌群zui可能數(shù)。如需對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，可參考GB/T5750.12-2006方法進(jìn)行。如所有管數(shù)均為陰性時(shí)，可報(bào)告總大腸菌群未檢出。

4. 注意事項(xiàng)：

4.1加入樣品后不需搖勻，平拿平放。

4.2 加樣時(shí)可用一次性無(wú)菌塑料吸管，將樣品稀釋液加至試劑盒所標(biāo)刻度處。

4.3 在培養(yǎng)箱中取試劑盒時(shí)應(yīng)平托出來(lái)，不要傾斜以免由于試劑盒的傾斜將陽(yáng)性管集氣窗中的氣泡排出而影響結(jié)果。

4.4 試劑盒為一次性無(wú)菌用品，供一次性使用。

加樣排氣泡 陽(yáng)性結(jié)果陰性結(jié)果

表3 十五管法總大腸菌群（MPN）檢索表

（總接種量55.5 mL，其中5份10 mL水樣，5份1mL水樣，5份0.1 mL水樣）

接種量，mL			總大腸菌群（MPN/100mL）	接種量，mL			總大腸菌群（MPN/100mL）
10	1	0.1	總大腸菌群（MPN/100mL）	10	1	0.1	總大腸菌群（MPN/100mL）
0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0	0 1 2 3 4 5	?2 2 4 5 7 9	1 1 1 1 1 1	0 0 0 0 0 0	0 1 2 3 4 5	2 4 6 8 10 12
0 0 0 0 0 0	1 1 1 1 1 1	0 1 2 3 4 5	2 4 6 7 9 11	1 1 1 1 1 1	1 1 1 1 1 1	0 1 2 3 4 5	4 6 8 10 12 14
0 0 0 0 0 0	2 2 2 2 2 2	0 1 2 3 4 5	4 6 7 9 11 13	1 1 1 1 1 1	2 2 2 2 2 2	0 1 2 3 4 5	6 8 10 12 15 17
0 0 0 0 0 0	3 3 3 3 3 3	0 1 2 3 4 5	6 7 9 11 13 15	1 1 1 1 1 1	3 3 3 3 3 3	0 1 2 3 4 5	8 10 12 15 17 19
0 0 0 0 0 0	4 4 4 4 4 4	0 1 2 3 4 5	8 9 11 13 15 17	1 1 1 1 1 1	4 4 4 4 4 4	0 1 2 3 4 5	11 13 15 17 19 22
0 0 0 0 0 0	5 5 5 5 5 5	0 1 2 3 4 5	9 11 13 15 17 19	1 1 1 1 1 1	5 5 5 5 5 5	0 1 2 3 4 5	13 15 17 19 22 24

續(xù)表

接種量，mL			總大腸菌群（MPN/100mL）	接種量，mL			總大腸菌群（MPN/100mL）
10	1	0.1	總大腸菌群（MPN/100mL）	10	1	0.1	總大腸菌群（MPN/100mL）
2 2 2 2 2 2	0 0 0 0 0 0	0 1 2 3 4 5	5 7 9 12 14 16	3 3 3 3 3 3	0 0 0 0 0 0	0 1 2 3 4 5	8 11 13 16 20 23
2 2 2 2 2 2	1 1 1 1 1 1	0 1 2 3 4 5	7 9 12 14 17 19	3 3 3 3 3 3	1 1 1 1 1 1	0 1 2 3 4 5	11 14 17 20 23 27
2 2 2 2 2 2	2 2 2 2 2 2	0 1 2 3 4 5	9 12 14 17 19 22	3 3 3 3 3 3	2 2 2 2 2 2	0 1 2 3 4 5	14 17 20 24 27 31
2 2 2 2 2 2	3 3 3 3 3 3	0 1 2 3 4 5	12 14 17 20 22 25	3 3 3 3 3 3	3 3 3 3 3 3	0 1 2 3 4 5	17 21 24 28 32 36
2 2 2 2 2 2	4 4 4 4 4 4	0 1 2 3 4 5	15 17 20 23 25 28	3 3 3 3 3 3	4 4 4 4 4 4	0 1 2 3 4 5	21 24 28 32 36 40
2 2 2 2 2 2	5 5 5 5 5 5	0 1 2 3 4 5	17 20 23 26 29 32	3 3 3 3 3 3	5 5 5 5 5 5	0 1 2 3 4 5	25 29 32 37 41 45

續(xù)表

接種量，mL			總大腸菌群（MPN/100mL）	接種量，mL			總大腸菌群（MPN/100mL）
10	1	0.1	總大腸菌群（MPN/100mL）	10	1	0.1	總大腸菌群（MPN/100mL）
4 4 4 4 4 4	0 0 0 0 0 0	0 1 2 3 4 5	13 17 21 25 30 36	5 5 5 5 5 5	0 0 0 0 0 0	0 1 2 3 4 5	23 31 43 58 76 95
4 4 4 4 4 4	1 1 1 1 1 1	0 1 2 3 4 5	17 21 26 31 36 42	5 5 5 5 5 5	1 1 1 1 1 1	0 1 2 3 4 5	33 46 63 84 110 130
4 4 4 4 4 4	2 2 2 2 2 2	0 1 2 3 4 5	22 26 32 38 44 50	5 5 5 5 5 5	2 2 2 2 2 2	0 1 2 3 4 5	49 70 94 120 150 180
4 4 4 4 4 4	3 3 3 3 3 3	0 1 2 3 4 5	27 33 39 45 52 59	5 5 5 5 5 5	3 3 3 3 3 3	0 1 2 3 4 5	79 110 140 180 210 250
4 4 4 4 4 4	4 4 4 4 4 4	0 1 2 3 4 5	34 40 47 54 62 69	5 5 5 5 5 5	4 4 4 4 4 4	0 1 2 3 4 5	130 170 220 280 350 430
4 4 4 4 4 4	5 5 5 5 5 5	0 1 2 3 4 5	41 48 56 64 72 81	5 5 5 5 5 5	5 5 5 5 5 5	0 1 2 3 4 5	240 350 540 920 1600 ＞1600

九、大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片使用說(shuō)明

1.適用范圍：適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗(yàn)

2.方法原理：耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform bacteria）是總大腸菌群的一部分．將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長(zhǎng)和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌（E.coli）是zui準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說(shuō)明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片運(yùn)用酶底物技術(shù)，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的顯色底物（XGLUC/blue），以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的顯色底物（SalmonGal/red）,經(jīng)過(guò)44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍(lán)色，紅色或紫藍(lán)色菌斑都屬耐熱大腸菌群。
3操作方法

3.1對(duì)于大腸菌群檢驗(yàn)顯示陽(yáng)性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉(zhuǎn)入2－3mL無(wú)菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

4 結(jié)果判讀: 測(cè)試片上出現(xiàn)紅色或紫藍(lán)色菌斑都是耐熱大腸菌群陽(yáng)性，其中紫藍(lán)色為大腸埃希氏菌陽(yáng)性。沒(méi)有紅色或紫藍(lán)色斑點(diǎn)為陰性結(jié)果。

十、致病菌檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明

1適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品中致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希氏菌（含腸出血性大腸桿菌O157:H7）、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測(cè)的檢測(cè)以及大腸菌群污染程度的檢測(cè)。

2方法原理：依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術(shù)將相對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時(shí)取用。

3樣品稀釋：同國(guó)標(biāo)法。液體樣品取原液。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液。

4致病菌檢測(cè)

4.1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml（不得少于4ml）分別加入到標(biāo)號(hào)為1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）內(nèi)。加樣后的1、2、3號(hào)分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液；A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。

4.2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18小時(shí)。

4.3 觀察結(jié)果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預(yù)示含有此種致病菌?？砂磭?guó)標(biāo)法進(jìn)一步檢測(cè)。也可取陽(yáng)性菌液1mL，加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內(nèi)，混勻，取1mL，接種到相對(duì)應(yīng)的測(cè)試片上，36℃±1℃培養(yǎng)18小時(shí)加以驗(yàn)證。

5大腸菌檢測(cè)

5.1加樣：將試劑盒放在試驗(yàn)臺(tái)面上，打開(kāi)盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個(gè)原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用滅菌吸管分別吸取3個(gè)1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi)，標(biāo)號(hào)為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對(duì)照孔使用。

5.2排氣泡：加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時(shí)可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡。

5.3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)。

5.4觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性結(jié)果的孔數(shù)越多，說(shuō)明污染越嚴(yán)重。

6 注意事項(xiàng)

6.1致病菌檢測(cè)與大腸菌檢測(cè)可同時(shí)進(jìn)行；加入樣品后不需搖勻；大腸菌檢測(cè)培養(yǎng)前一定要排氣泡，排氣泡的方法與結(jié)果觀察可參見(jiàn)中大腸菌試劑盒使用說(shuō)明中的圖像顯示；在培養(yǎng)箱中取試劑盒時(shí)注意平托出來(lái)，避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽(yáng)性集氣窗中的氣泡流失而影響結(jié)果判斷。

6.2試劑盒為一次性無(wú)菌包裝用品，供一次性即開(kāi)即用，。

7 保存條件和有效期：避光保存于陰涼干燥處，溫度為2～8℃，有效期18個(gè)月。

十一、沙門氏菌測(cè)試片使用說(shuō)明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中沙門氏菌的檢測(cè)以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括那些引起食物中毒、導(dǎo)致腸胃炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。能引起食物傳播性疾病，近年來(lái)，已經(jīng)成為zui常見(jiàn)的食物中毒原因。腸炎沙門氏菌感染通常源于奶制品、禽產(chǎn)品和肉產(chǎn)品；雞肉和雞蛋尤其是高風(fēng)險(xiǎn)食品。沙門氏菌感染的癥狀通常是腸胃出現(xiàn)問(wèn)題，包括惡心、腹部絞痛、嘔吐和腹瀉，一般zui多持續(xù)7天。在免疫力低下的人群中，如果不及時(shí)服用抗生素類藥品，沙門氏菌感染將導(dǎo)致生命危險(xiǎn)。沙門氏菌測(cè)試片（Salmonella Count Plate BS205）含有選擇性培養(yǎng)基、沙門氏菌*辛酯酶的顯色指示劑和高分子吸水凝膠，運(yùn)用微生物測(cè)試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15-24h就可確認(rèn)是否帶有沙門氏菌。

2 操作方法

2.1 樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將沙門氏菌測(cè)試片（BS205）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個(gè)樣品接種兩片。

2.3 培養(yǎng)： 將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過(guò)12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 結(jié)果判讀: 對(duì)測(cè)試片進(jìn)行觀察，呈紫紅色的菌落為沙門氏菌；呈藍(lán)色的菌落為其他菌群。出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒(méi)有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

4 附加說(shuō)明

4.1有關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)表明，接純菌種（包括硫化氫陰性菌株）可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，其他腸桿菌呈藍(lán)色，葡萄球菌不生長(zhǎng)。

4.2測(cè)試片具有較強(qiáng)的敏感性，在1.5×10^-8稀釋時(shí)仍可計(jì)算出菌落。臨床實(shí)際應(yīng)用結(jié)果顯示陽(yáng)性檢出率高于分離培養(yǎng)法1.84‰，復(fù)查準(zhǔn)確率提高約13.0%（中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志2006,16（8）：954-955.）。

4.3注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

十二、金黃色葡萄球菌測(cè)試片使用說(shuō)明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus簡(jiǎn)稱金葡菌）是人類zui常見(jiàn)的致病菌之一，其侵襲力很強(qiáng)，能產(chǎn)生多種致病物質(zhì)如：腸毒素、凝固酶等；可引起化膿性炎癥、毒素性疾病及葡萄球菌性腸炎。金葡菌所引起的中毒事件已成為世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題，我國(guó)每年由金葡菌引起的食物中毒事件屢有報(bào)道。金黃色葡萄球菌測(cè)試片（Staph Count Plate BT206）含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑，運(yùn)用微生物測(cè)試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15-24h就可確定出病原菌的存在。

2 操作方法

2.1 樣品處理：：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將金黃色葡萄球菌測(cè)試片（BT206）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個(gè)樣品接種兩片。

3 結(jié)果判讀:紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌；呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒(méi)有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

4 附加說(shuō)明

4.1有關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)表明，金黃色葡萄球菌測(cè)試片接純菌種可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，普通大腸桿菌呈藍(lán)色菌落，而沙門氏菌，變形桿菌在測(cè)試片上不生長(zhǎng)。測(cè)試片的敏感度為1.2×10^-8。通過(guò)檢測(cè)211份糕點(diǎn)、熟肉、鮮肉和奶制品樣品，測(cè)試片法和國(guó)標(biāo)法的陽(yáng)性率分別為10.43％和7.58％（中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志2007，17（8）：1456－1457.）。

4.2山東省疾病預(yù)防控制中心的驗(yàn)證結(jié)果表明，當(dāng)金黃色葡萄球菌在0～9個(gè)菌落范圍內(nèi)時(shí)，測(cè)試片與血平板均能檢出，作為致病菌不得撿出的標(biāo)準(zhǔn)要求，可以作為金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)應(yīng)用。

4.3注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

十三、副溶血弧菌測(cè)試片使用說(shuō)明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中副溶血弧菌的檢測(cè)以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一種廣泛分布于海洋與鹽湖中的嗜鹽性細(xì)菌，海產(chǎn)品中常有此菌，它是引起食源性疾病的主要病原之一，是夏、秋季沿海地區(qū)食物中毒和急性腹瀉的重要病原。據(jù)國(guó)家食源性疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢(shì)，已成為我國(guó)一個(gè)嚴(yán)重的食源性公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。該菌引起的食物中毒臨床上表現(xiàn)為：上腹部疼痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱等，腹瀉多為水樣便，亦有大便膿血，隨后腹部劇烈疼痛，持續(xù)1-2天。副溶血弧菌測(cè)試片（BH209）是一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有高選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分，培養(yǎng)15～24小時(shí)就可確認(rèn)是否有病原菌的存在。

2 操作方法

2.2 接種：將副溶血弧菌測(cè)試片（BH209）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個(gè)樣品接種兩片。

3 結(jié)果判讀: 呈紫紅色的菌落為副溶血弧菌。多數(shù)非目的菌在測(cè)試片上不生長(zhǎng)，少數(shù)能生長(zhǎng)，如創(chuàng)傷弧菌和霍亂弧菌，但菌落呈藍(lán)色，明顯區(qū)別于目的菌。出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒(méi)有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

4 附加說(shuō)明

4.1 汕頭出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明，副溶血弧菌測(cè)試片具有較高的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性，對(duì)純菌的檢測(cè)靈敏度達(dá)到8cfu/mL，與SN標(biāo)準(zhǔn)方法符合率達(dá)到90%以上。

4.2 注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

十四、大腸桿菌測(cè)試片使用說(shuō)明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中大腸桿菌的檢測(cè)以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。腸出血性大腸桿菌O157:H7是一種新出現(xiàn)的食物傳播性疾病的病因。它除引起腹瀉、出血性腸炎外，還可發(fā)生溶血性尿毒綜合癥、血栓性血小板減少性紫癜等嚴(yán)重的并發(fā)癥。自1982年美國(guó)*發(fā)現(xiàn)因該致病菌引起的食物中毒以來(lái)，腸出血性大腸桿菌O157:H7疫情開(kāi)始逐漸擴(kuò)散和蔓延，相繼在英國(guó)、加拿大、日本等多個(gè)國(guó)家引起腹瀉爆發(fā)和流行。我國(guó)已陸續(xù)有十余個(gè)省份在市售食品、進(jìn)口食品、腹瀉病患者、家畜家禽等分離到大腸桿菌O157:H7。大腸桿菌測(cè)試片（BO204）采用進(jìn)口高選擇性培養(yǎng)基作為主要原料，加入特異性酶顯色劑，運(yùn)用微生物測(cè)試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15～24h就可確認(rèn)。

2 操作方法

2.2 接種：將大腸桿菌測(cè)試片（BO204）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個(gè)樣品接種兩片。

3 結(jié)果判讀: 對(duì)測(cè)試片進(jìn)行觀察，呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157:H7；呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒(méi)有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

4 附加說(shuō)明

4.1本品所用培養(yǎng)基已在國(guó)外得到比較廣泛的應(yīng)用，有關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)表明，接純菌種可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，靈敏度達(dá)到98%（K.A. Betheim. 1998. J. Clin. Microbiol. 85：425-428）。

4.2本公司檢測(cè)大腸桿菌測(cè)試片對(duì)純菌的檢測(cè)靈敏度為0.5 cfu/mL，3次試驗(yàn)結(jié)果測(cè)試片與平皿的符合率平均達(dá)到96.3％。

4.3注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

十五、阪崎腸桿菌測(cè)試片使用說(shuō)明

1 適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品等中阪崎腸桿菌的檢測(cè)以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。

2 方法原理：測(cè)試片是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，由阪崎腸桿菌選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異性酶顯色劑等組成，一步培養(yǎng)15～24小時(shí)就可確定出目標(biāo)菌的存在。

3操作方法

3.1樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。

3.2接種：將測(cè)試片置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每個(gè)樣品接種2片。

3.3 培養(yǎng)：將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過(guò)12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3.4 結(jié)果判別: 對(duì)測(cè)試片進(jìn)行觀察，呈藍(lán)綠色的菌落為阪崎腸桿菌。對(duì)于出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣品，用其他方法作進(jìn)一步的鑒定。

4 附加說(shuō)明

4．1阪崎腸桿菌純菌株產(chǎn)生典型的藍(lán)綠色點(diǎn)，接種一些腸道菌如大腸桿菌、腸炎沙門氏菌等時(shí)，一加樣下去就會(huì)出現(xiàn)有紫色的點(diǎn)或暈狀，此為產(chǎn)品本身顯色劑的原因，不影響產(chǎn)品的使用和結(jié)果判讀；而金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157和副溶血性弧菌等均被抑制。

4．2本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測(cè)，用取樣棉簽涂抹被測(cè)物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測(cè)試片上。

4．3注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

十六、蠟樣芽胞桿菌測(cè)試片使用說(shuō)明

1 適用范圍：適用于生活飲用水、水源水、食品以及人體體檢樣品中蠟樣芽胞桿菌的檢測(cè)。以及突發(fā)事件應(yīng)急檢測(cè)需要。

2方法原理：采用一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有高選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分，培養(yǎng)15～24小時(shí)就可確認(rèn)是否有目標(biāo)菌的存在。

3操作方法

3.1樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。

3．2接種：將測(cè)試片置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每個(gè)樣品接種2片。

3．3培養(yǎng)：將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過(guò)12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3．4結(jié)果判別:對(duì)測(cè)試片進(jìn)行觀察，蠟樣芽胞桿菌產(chǎn)生典型的藍(lán)綠色點(diǎn)，而大部分非目標(biāo)菌如大腸桿菌、大腸桿菌O157、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌和阪崎腸桿菌等均被抑制。

4附加說(shuō)明

4．1本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測(cè)，用取樣棉簽涂抹被測(cè)物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測(cè)試片上。

4.2注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

4．3出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒(méi)有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

：李菲 :

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