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《食用菌中凝集素的測定高效液相色譜法》國家標(biāo)準(zhǔn)征求意見

2021-10-15 08:46:44 來源：儀表網(wǎng) 閱讀量：7669

　　根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會國家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計劃，由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口的《食用菌中凝集素的測定高效液相色譜法》(計劃號：20202637-T-424)國家標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)已形成征求意見稿，按照《國家標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》的有關(guān)規(guī)定，現(xiàn)向社會各界公開征求意見。

　　目前，食用菌是一種富含多種活性成分的優(yōu)良蔬菜，我國是世界食用菌生產(chǎn)第一大國，目前食用菌產(chǎn)量占全球總產(chǎn)量的75%以上，2014年，全國食用菌產(chǎn)量已超過3000萬噸。食用菌產(chǎn)品出口126個國家和地區(qū)，食用菌出口量約占亞洲出口總量的80%，占全球貿(mào)易量的40%。食用菌總產(chǎn)值在我國種植業(yè)中的排名，僅次于糧、棉、油、菜、果，居第六位。食用菌產(chǎn)業(yè)已成為我國種植業(yè)的一項新興的支柱產(chǎn)業(yè)和新的經(jīng)濟增長點。其中2011年，我國食用菌產(chǎn)值已超過1400億元，出口創(chuàng)匯達(dá)24.07億美元。

　　食用菌產(chǎn)品主要以鮮銷、干制、鹽漬、速凍等方式為主，在其加工生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生大量的廢棄物，主要有菌腳、菇片、菌柄基部等。這些廢棄物難以食用或商品價值低，開發(fā)利用率極低，多限于在動物飼料和有機肥中使用，因此對食用菌加工廢棄物中的主要活性成分進(jìn)行深入研究，制定相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)是企業(yè)快速發(fā)展和進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量控制的需要。

　　凝集素的檢測方法在國內(nèi)外還沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，因此急需建立一套科學(xué)合理的凝集素檢測體系，為凝集素產(chǎn)品研發(fā)及食用菌綜合開發(fā)利用提供依據(jù)，進(jìn)而引導(dǎo)生產(chǎn)，規(guī)范市場。所以，本標(biāo)準(zhǔn)的制定也是完善食用菌及其加工產(chǎn)品檢測方法國家標(biāo)準(zhǔn)的需要。

　　高效液相色譜(HPLC)是目前能夠快速分析凝集素的重要技術(shù)手段，可以結(jié)合超濾、離子交換層析、分子排阻層析以及親和層析等技術(shù)，從而獲得高純度的凝集素，提高了純化的效率。

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了基于高效液相色譜法的食用菌中凝集素的測定方法的范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、食用菌中凝集素的測定方法、結(jié)果計算與表示、精密度。

　　本標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容包括：范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑、儀器和設(shè)備、測定步驟、空白試驗、結(jié)果計算與表示、精密度和回收率、檢出限、檢驗報告等。

　　方法原理：

　　試樣中菌菇凝集素經(jīng)硫酸銨沉淀、超濾富集后，高效液相色譜法測定，以保留時間定性，外標(biāo)法定量。

　　儀器和設(shè)備：

　　1.高效液相色譜儀：配紫外檢測器。2.超聲波振蕩器。3.分析天平，感量 0.01g 和 0.0001g。4.離心機，5000 r/min 以上。5. 破壁機。6.超濾離心管：50 mL，10 kd。7.容量瓶：5 mL。8.燒杯：50 mL，500 mL。9.凝膠色譜柱，TSKgel G2000SWXL，7.8 mm I.D.×30 cm，5 μm，或相當(dāng)規(guī)格色譜柱。10.針式微孔過濾器：0.22 um，直徑 13 mm 的聚四氟乙烯(PTFE)濾膜或者相當(dāng)者。11.離心管：50 mL。

　　凝集素提?。?br />

　　鮮樣：

　　取處理好的鮮樣 50 g 于破壁機中，加入 1:30 的磷酸鹽提取液勻漿，勻漿完成后放入 500 mL 燒杯中，在超聲波振蕩器中超聲 30 min，超聲完成后在 4℃冰箱中放置 4 h。放置混勻后稱取 20 g 勻漿以 8000r/min 的轉(zhuǎn)速離心 20 min，離心完成后用濾紙過濾，取過濾后的濾液 5 g 放入燒杯中，加入 5 g 30%的硫酸銨溶液，并用超濾離心管以 8000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心 15 min 超濾 6 次，將超濾之后的上清液轉(zhuǎn)入 5 mL容量瓶中，用水定容，過 0.22 um 的水系針式濾膜，以供液相檢測使用。

　　干樣：

　　取處理好的干樣1 g于燒杯中，加入1:45的磷酸鹽提取液在超聲波振蕩器中超聲30 min，超聲完成后在4℃冰箱放置 4h。放置混勻后稱取20 g以8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心20 min，離心完成后用濾紙過濾，取過濾后的濾液 2g放入燒杯中，加入10 g 30%的硫酸銨溶液，并用超濾離心管以8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min超濾6次，將超濾之后的上清液轉(zhuǎn)入5毫升容量瓶中，用水定容，過0.22 μm的水系針式濾膜，以供液相檢測使用。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于食用菌中凝集素的測定。

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