伏馬菌素B1試劑盒

說(shuō)明
本測(cè)試盒用間接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析法定量測(cè)定玉米中的伏馬菌素B1（FB1）。該測(cè)試盒反應(yīng)孔可拆卸，可測(cè)單份樣品，也可測(cè)多份樣品，定量分析時(shí)需有微孔板酶標(biāo)儀。

1 伏馬菌素B1試劑盒概要
FB1是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素，主要污染玉米及其制品。可誘發(fā)馬的腦白質(zhì)軟化癥和豬的肺水腫綜合癥。FB1對(duì)多種動(dòng)物有腎臟毒性、肝臟毒性作用，對(duì)大鼠肝細(xì)胞和雞巨噬細(xì)胞有細(xì)胞毒性。據(jù)報(bào)道，F(xiàn)B1與食管癌發(fā)病率有明顯相關(guān)性，癌癥研究中心把FB1劃分到2B組，即人類(lèi)可能的致癌物。因此FB1對(duì)人類(lèi)健康和畜牧業(yè)發(fā)展構(gòu)成潛在威脅，成為繼黃曲霉毒素后的又一個(gè)研究熱點(diǎn)。

目前檢測(cè)糧食和飼料中FB1的儀器方法有液相色譜、氣相色譜、質(zhì)譜和毛細(xì)管電泳法等，這些方法靈敏度較高，結(jié)果穩(wěn)定，但所需儀器設(shè)備昂貴，樣品準(zhǔn)備耗時(shí)長(zhǎng)，不適于大量樣品的篩選。本試劑盒是以應(yīng)用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測(cè)方法，可以準(zhǔn)確快速檢測(cè)玉米中的FB1。

2 測(cè)定原理
本試劑盒用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，利用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法進(jìn)行測(cè)定。用抗原包被微孔板，加入FB1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、FB1單克隆抗體進(jìn)行孵育后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標(biāo)記的抗鼠IgG抗體（酶標(biāo)物）孵育，加入顯色液顯色，經(jīng)終止液終止后，用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定OD值。

3 提供的物品
微孔板
5個(gè)濃度的FB1標(biāo)準(zhǔn)溶液（各1mL）
標(biāo)準(zhǔn)1：0ng/mL ……………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)2：50ng/mL ……………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)3：100ng/mL …………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)4：200ng/mL …………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)5：500ng/mL …………………………………………………………直接使用
FB1單克隆抗體溶液（6mL） ………………………………………………………直接使用
酶標(biāo)物（12mL） …………………………………………………………………直接使用
顯色液（12mL） …………………………………………………………………直接使用
終止液（6mL） ………………………………………………………………………直接使用
濃縮洗液（30mL） …………………………………………………………………稀釋使用
空白對(duì)照（6mL） …………………………………………………………………直接使用

4 盒中未提供，需自備物品
微孔板酶標(biāo)儀（含450nm）、振蕩器、粉碎機(jī)、微量移液器
量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙
氯化鈉（分析純）、甲醇（分析純）、去離子水或蒸餾水

5 操作者注意事項(xiàng)
標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有FB1毒素，應(yīng)特別小心。
終止液為1N硫酸，避免接觸皮膚。
每次加樣后立即將所有試劑放回2~8 ℃。
每步加樣時(shí)間應(yīng)控制在5min內(nèi)。
孵育過(guò)程中應(yīng)避光。
不要使用過(guò)期試劑盒。
不要交叉使用不同批號(hào)的試劑盒中的試劑。

6 儲(chǔ)存條件
保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍
顯色液對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
將不用的微孔板放進(jìn)原鋁箔袋中，置2~8℃保存。

7 試劑變質(zhì)的標(biāo)志
標(biāo)準(zhǔn)1的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8 樣品處理程序
----樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存；
----取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化鈉及25mL 70%甲醇溶液；
----強(qiáng)力振蕩3分鐘；
----用快速定性濾紙過(guò)濾；
----取1mL處理后的樣品，用1%氯化鈉溶液稀釋10倍；
----取50μL稀釋液進(jìn)行分析。
----*根據(jù)需要可以增加樣品量，但甲醇溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加。

9 酶免疫分析程序
----濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時(shí)與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。
----取所需數(shù)量的板條插入微孔架，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置。
----加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。
----加入50mL抗FB1單克隆抗體使用液到每個(gè)微孔（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入酶標(biāo)物100mL，37℃孵育60min。
----用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入顯色液100mL（2滴），37℃孵育10min。
----每孔加入終止液50mL（1滴），立即用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450nm處測(cè)定吸光度值（OD值）。

10 樣品濃度計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD值的比值為縱坐標(biāo)，所對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（ng/mL）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)樣品OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD的比值，可從曲線(xiàn)上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為FB1濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中FB1濃度C（ng/mL），按下列公式計(jì)算出樣品中FB1含量：
FB1含量（mg/kg）= C×K
式中：C：稀釋后樣品提取液中FB1含量（ng/mL）
K：樣品稀釋倍數(shù)（本提取方法為50）

11 主要技術(shù)指標(biāo)及參數(shù)
測(cè)試盒zui低檢出濃度54.5ng/mL，回收率70%~120%，交叉反應(yīng)系數(shù)小于1%，試劑盒校正曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍50ng/mL~500ng/mL，試劑盒條內(nèi)變異＜10%，條間變異＜15%。