| 訂貨號： | R5903 |
| 產(chǎn)品名稱： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇特快速檢測 （5分鐘） |
| 產(chǎn)品英文名稱： | DON Express |
| 包裝： | 32次檢測 |
| 產(chǎn)品介紹： | 無 |
| 產(chǎn)品說明： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇特快速檢測 （5分鐘） 半定量分析 |
| 訂貨號： | R5902 |
| 產(chǎn)品名稱： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇快速檢測 （15分鐘） |
| 產(chǎn)品英文名稱： | FAST DON |
| 包裝： | 48次檢測 |
| 產(chǎn)品介紹： | 請 |
| 產(chǎn)品說明： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇快速檢測 （15分鐘） AOAC 認(rèn)證方法 |
| 訂貨號： | R5901 |
| 產(chǎn)品名稱： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇快速檢測 （15分鐘） |
| 產(chǎn)品英文名稱： | FAST DON |
| 包裝： | 96次檢測 |
| 產(chǎn)品介紹： | 請 |
| 產(chǎn)品說明： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇快速檢測 （15分鐘） AOAC 認(rèn)證方法 |
| 訂貨號： | R5906 |
| 產(chǎn)品名稱： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 （高靈敏度） |
| 產(chǎn)品英文名稱： | DON |
| 包裝： | 96次檢測 |
| 產(chǎn)品介紹： | 無 |
| 產(chǎn)品說明： | 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 （高靈敏度） 單克隆抗體 |
嘔吐毒素高靈敏度檢測試劑盒
RIDASCREEN? DON
酶聯(lián)免疫分析快速定量測定脫氧雪腐鐮刀菌烯醇毒素試劑盒德國R-Biopharm制造（中文翻譯件僅供參考，以試劑盒內(nèi)附的英文原件為準(zhǔn)）。
RIDASCREEN? DON（產(chǎn)品編號：R5906）
1. 用途
RIDASCREEN? DON采用競爭性的酶免疫分析法定量分析谷物、麥芽、啤酒及飼料中的嘔吐毒素。試劑盒中含有酶免疫分析法所用的所有的試劑。試劑盒可以進行96個試驗，包括標(biāo)準(zhǔn)。定量分析要求使用酶標(biāo)板讀數(shù)儀（含450nm波長）。
2. 概要
化學(xué)上稱作脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol）的嘔吐毒素（Vomitoxin）屬于霉菌的單端孢菌素族，是由幾種粉色鐮刀霉真菌屬產(chǎn)生的。玉米中zui容易產(chǎn)生這種毒素，通常在歐洲及北美發(fā)現(xiàn)的三種毒素是脫氧雪腐鐮刀菌烯醇， 3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，15脫氧雪腐鐮刀菌烯醇。嘔吐毒素在小麥、玉米以及稻米中的含量通常是mg/kg級的，由于他們高的細(xì)胞毒素及免疫抑制性質(zhì)，對人類及動物構(gòu)成了健康威脅。使用RIDASCREEN? DON 試劑盒可以檢測谷物、玉米、大麥及飼料樣品中的嘔吐毒素，具有快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點。
3.測定原理
測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有針對嘔吐毒素小鼠IgG的捕捉抗體。加入嘔吐毒素抗體，酶標(biāo)記物，標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液。游離嘔吐毒素與酶標(biāo)記物競爭嘔吐毒素抗體，同時嘔吐毒素抗體與捕捉抗體連接。沒有連接的酶標(biāo)記物在洗滌步驟中被除去。將酶基質(zhì)（過氧化尿素）和發(fā)色劑（四甲基聯(lián)苯胺）加入到孔中并且孵育。結(jié)合的酶標(biāo)記物將紅色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)停止液后使顏色產(chǎn)生變化。在450nm處測量，吸收光強度與樣品中的濃度成反比。
4. 提供的試劑
每一個盒中的試劑足夠進行91個測量（附加5個標(biāo)準(zhǔn)分析孔），盒中的材料如下：
1 X 96孔板（12條X 8孔，可以拆分為單孔）包被有捕捉抗體
5 X 標(biāo)準(zhǔn)液， 1.3ml/瓶， 為嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液
標(biāo)準(zhǔn)液濃度為：0ppb；3.7ppb；11.1ppb；33.3ppb；100ppb
1 X 嘔吐毒素抗體溶液（6ml）小鼠單克隆………………黑色帽
1 X 酶標(biāo)記的嘔吐毒素（6ml）……………………………紅色帽
1 X 基質(zhì)/發(fā)色劑（12ml）………………………………白色滴瓶
1 X 反應(yīng)停止液1M硫酸（12ml）………………………黃色滴瓶
1 X 洗液：10mM的磷酸鹽緩沖液（PH 7.4）含有0.05%的Tween20
5. 需要的材料但盒中不提供
5.1設(shè)備
----微孔板酶標(biāo)儀（450nm）定量分析用
----振蕩器
----粉碎機
----50ul， 100ul， 1000ul微量加樣器
----100ml，1L量筒
----50ml 漏斗及容量瓶
----Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙
5.2 試劑
----蒸餾水或去離子水
6. 操作者應(yīng)該注意之事項
----標(biāo)準(zhǔn)液含有嘔吐毒素，應(yīng)特別小心
----使用過的玻璃容器及嘔吐毒素溶液用pH 7的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡過夜
----反應(yīng)停止液為1M硫酸，避免接觸皮膚
----不要使用過了有效日期的試劑盒， 稀釋或攙雜使用會引起 靈敏度的降低
----不要交換使用不同批號的盒中試劑
7. 儲存條件
----保存試劑盒于2-8℃。不要冷凍
----基質(zhì)/發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下
----將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封
8. 試劑變質(zhì)的跡象
紅色的基質(zhì)/發(fā)色劑變?yōu)樗{色，表明基質(zhì)/發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。
0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.6個單位（A450nm<0.6）時，表示試劑可能變質(zhì)。
9. 樣品處理
樣品應(yīng)當(dāng)在暗處及冷藏保存
9.1谷物、麥芽、飼料
----粉碎5g有代表性的樣品與25ml蒸餾水混合
----強力振蕩3分鐘
----用Whatman 濾紙過濾
----取50ul稀釋液進行分析
根據(jù)需要可以增加樣品量，但溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加（例如：樣品50g+1000ml蒸餾水）
9.2 啤酒
----取足夠量的啤酒樣品，除去過量的CO2
例如：攪拌啤酒樣品，直至不產(chǎn)生明顯的氣泡。如果啤酒樣品產(chǎn)生混濁，在除去過量的CO2之后，建議在樣品檢測之前，要進行無菌過濾。
9.3麥芽汁
----取50μl樣品到每個微孔板底
如果樣品產(chǎn)生混濁，建議在樣品檢測之前，要進行無菌過濾。
10. 酶標(biāo)免疫分析程序
10.1測定之前注意事項
1. 使用之前將所有試劑回升至室溫（20-25℃）。
2. 使用之后立即將所有試劑放回2-8 ℃。
3. 如果樣品量大建議使用多通道移液器，在使用中不要讓微孔干燥。
4. 在EIA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性，仔細(xì)按照*的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點。
5. 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋子蓋住微孔。
10.2包被有抗體的微孔板條
錫箔袋沿橫向壓皺外邊打開。取出需用數(shù)量的微孔板及框架， 將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封， 保存于2-8℃。不要冷凍。
10.3標(biāo)準(zhǔn)液
嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)液為直接應(yīng)用液。
10.4制備洗液緩沖液
方法一：
試劑盒中裝有磷酸鹽小袋，每個小袋用1L蒸餾水溶解，溶解的洗液在4oC條件下可以保存4周。
方法二：
將磷酸鹽每小袋只用100ml蒸餾水溶解，這樣可以得到一個10倍的緩沖液濃縮液。這種溶液在室溫（18-22°C）下，可保存8周。
使用時，1倍的濃縮液+9倍的蒸餾水稀釋即可得到待用的洗滌緩沖液。
10.5測定程序（在18-24℃條件下操作）
1. 根據(jù)樣品量將足夠數(shù)量的孔條插入微孔架，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)位置。
2. 加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)或處理好的樣品到各自的微孔中，每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。
3. 加入50ul酶標(biāo)記物到微孔底部（紅色蓋）。（注意移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體，避免交叉污染。）
4. 加入50ul抗體溶液（黑色蓋）到每一個微孔底部，充分混合，在室溫（20-25°C）孵育30（+/-1）分鐘。（注意此操作步驟要快，盡量保持前后孔孵育時間的*，如果實驗所用孔數(shù)量多，請用多通道移液器。移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體）。
5. 倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證*除去孔中的液體。用洗瓶或多通道移液器將250ul洗滌緩沖液加入孔中。再次倒出孔中的液體，*除去孔中的液體，再重復(fù)操作洗滌步驟兩次以上。（移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體，避免污染洗滌液造成洗板不*。洗板后要立即進行下一步操作，避免板孔干躁造成重復(fù)性差）。
6. 加入 2滴（或100ul）基質(zhì)/發(fā)色試劑（白色滴瓶）到微孔中， 充分混合并在室溫（20-25℃）暗處孵育15（+/-0.5）分鐘（注意此操作步驟要快，盡量保持前后孔孵育時間的*，使用多通道移液器加液，移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體）。
7. 加入 2滴（或100ul）反應(yīng)停止液（黃色滴瓶）到微孔中混合好， （注意此操作步驟要快，如果實驗所用孔數(shù)量多，請將所需數(shù)量的滴瓶中液體轉(zhuǎn)移至V型試劑槽中，并用多通道移液器加液。）在450nm處測量吸光度值以空氣為空白，必須在加入停止液后10分鐘內(nèi)讀取光度值。
11. 結(jié)果
定量分析：所獲得的標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光度值除以*個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值再乘以100.因此0標(biāo)準(zhǔn)等于*并且以百分比給出吸光度值。
標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值（或樣品）
----------------------------------x 100= %吸光度值
0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值
計算的標(biāo)準(zhǔn)值繪成為一個對應(yīng)嘔吐毒素濃度（?g/kg）的半對數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲線圖， 相對應(yīng)每一個樣品的濃度（?g/kg）可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。
請注意：
為了獲得樣品的實際濃度，從曲線上讀出的數(shù)據(jù)，要乘以相應(yīng)的稀釋系數(shù)。
谷物、大麥、飼料………………………………5
啤酒………………………………………………1
麥芽汁……………………………………………1
12. 特異性
RIDASCREEN? DON試劑盒的特異性通過對相應(yīng)的毒素進行交叉反應(yīng)性分析而得到的。
交叉反應(yīng)
13. 再現(xiàn)性
由三個不同的實驗結(jié)果確定了室內(nèi)精密度，圖2顯示出RIDASCREEN嘔吐毒素試劑盒的精密度情況， 獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)嘔吐毒素濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
14. 檢測下限
谷物、大麥、飼料………………………………18.5?g/kg
啤酒………………………………………………3.7?g/kg
麥芽汁……………………………………………3.7?g/kg
