MP Bio G418 geneticin遺傳霉素
簡單介紹：G418是一種對原核及真核細胞都具毒性的氨基糖苷類抗生素,它具有干擾蛋白合成的功能，可用來篩選表達G-418抗性基因(如:氨基糖苷3'磷酸轉移酶[APH 3'])的培養(yǎng)細胞, 在分子遺傳試驗中常被用作抗性篩選。它通過抑制轉座子Tn601，Tn5的基因對原核和真核等細胞產生毒素,包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞,也包括原生動物和蠕蟲。當neo基因被整合進真核細胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為mRNA,從而獲得抗性產物的高效表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面得以廣泛應用。
G418 Sulfate（G418liu酸鹽），也稱作Geneticin（遺傳霉素），是一種結構類似于*B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷類抗生素，通過影響80S核糖體功能和阻斷延伸步驟來干擾蛋白合成，對原核和真核等細胞都有毒性 ,包括細菌、酵母、高等植物和哺乳動物細胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。其抗性基因（主要為neo基因）位于轉座子Tn601（903）或Tn5（來源于細菌），但是可以在真核細胞中表達。通過基因重組技術將這些抗性基因導入細胞，使其獲得對G418的耐藥性，從而用來篩選和維持培養(yǎng)攜帶抗性基因的原核或者真核細胞。
MP Bio G418 geneticin遺傳霉素
哺乳動物細胞中，當抗性基因neo被整合進真核細胞基因組后 ,使其編碼表達氨基糖苷磷酸轉移酶（amino-glycoside 3’-phosphotransferase，APH(3)II）。此酶通過共價修飾G418的氨基或羥基功能，抑制抗生素-核糖體間的相互作用，從而使得抗生素失活。這一特性賦予細胞產生抗性。穩(wěn)轉細胞株篩選實驗，需要建立殺滅曲線（劑量反應曲線）確定殺死無抗性細胞的zui低有效濃度。
植物細胞中，通過轉染攜帶nptII基因的抗性質粒孵育其抗性。nptII基因也能編碼表達氨基糖苷磷酸轉移酶，這個酶使得多種抗生素喪失活性，包括G418，*和*。
使用方法
1. G418儲存液的配制（50mg/ml，活性濃度）
- 活力單位的換算
根據此公式進行換算：（1000/A0）×A1=A2，其中A0是G418的活力值（Potency），因批次而異?？梢娕螌馁|檢報告，或者瓶子上的標簽。A1是想配制的活性G418濃度。A2是實際稱重的粉末與體積比濃度。
比如若所用批次的G418 活力值為：750 µg/mg，要配制50mg/ml的G418活性濃度，則實際要配制的粉末濃度為1000/750×50 mg/ml=66.33 mg/ml。
如果配制10ml的G418儲存液（活性濃度，50 mg/ml），則需要稱取663.3mg粉末。
- 除菌和保存
根據上述換算得到的實際粉末稱重量，加入10 ml無菌去離子水內使其*溶解。
先用5ml無菌去離子水預濕潤0.22μm針頭式過濾器，除盡水。之后使用此濾器過濾，除菌后分裝成單次使用的小量（如1ml）放到-20℃凍存，1年穩(wěn)定。
