在WesternBloting實驗中,也許存在總蛋白濃度測定不精確,或許蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時產(chǎn)生的樣品間的操作差錯;這些差錯可以經(jīng)過測定每個樣品中實際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參,比方內(nèi)參GAPDH的含量來進行校對。當(dāng)然除了GAPDH抗體,β-Actin抗體、β-Tubulin抗體等也是zui常見的內(nèi)參抗體。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)是參加糖酵解的一種關(guān)鍵酶,由4個30-40kDa的亞基構(gòu)成,分子量146kDa,檢查條帶大約在36kDa。GAPDH基因簡直在所有組織中都高水平表達,廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。
選擇合適的GAPDH抗體顯得尤為重要,首先GAPDH的WB檢測條帶大約為36kDa,因此對于一些待檢測分子量大于40kDa或者小于30kDa的目的蛋白尤為合適。一般來說,國產(chǎn)的抗體在質(zhì)量穩(wěn)定性、效價等方面存在不足,但是進口品牌如Abcam、Millipore、CST等價格偏高,一般在¥3000/100ul左右。下面我們?yōu)槟?三款GAPDH*抗體。Abbkine的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody(貨號A01020)是小鼠源的單抗,其效價很高,廠商*的WB起始稀釋比率為1:1000,實際應(yīng)用過程中,有使用1:10000或更高的報告,遠遠高于此稀釋比率,說明其免疫效價很高,另外,其檢測種屬也很多,包括人、牛、豬、小鼠、大鼠等。上圖為Abbkine的Anti-GAPDH MonoclonalAntibody(貨號A01020)在不同細胞系內(nèi)WB的檢測結(jié)果。
產(chǎn)品名稱及描述 | 貨號 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品說明 | |
Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5) | A01020 | 50ul/1ml | 詳情 | |
GAPDH Polyclonal Antibody | ABP50152 | 30ul/200ul | 詳情 | |
HRP Conjugated Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody ( 2B5) | A01025 | 50ul/1ml | 詳情 |
Abbkine的HRP, Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5) (貨號A01025)則是一款HRP直標(biāo)的小鼠源單克隆GAPDH抗體,由于是HRP直接標(biāo)記,因此不會受到二抗的干擾,在一些IP應(yīng)用中非常合適,可有效排除IP-WB時的重鏈干擾。下圖為Abbkine的GAPDH Monoclonal Antibody(貨號A01020)抗體在石蠟包埋、福爾馬林固定的切片上的應(yīng)用。
更多GAPDH內(nèi)參抗體以及其他如Actin、Tubulin等其他內(nèi)參抗體,請。
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