菌落總數(shù)測試片
| 目 錄 一、 適用范圍 二、 實驗前的準(zhǔn)備工作及操作中的注意事項 三、 生活飲用水微生物常規(guī)指標(biāo)及限值 四、 檢測流程圖 五、 菌落總數(shù)測試片使用說明 六、 飲用水大腸菌群檢驗紙片使用說明 七、 水質(zhì)大腸菌群檢驗紙片使用說明 八、 大腸菌群檢測試劑盒使用說明 九、 大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片使用說明 十、 致病菌檢測試劑盒使用說明 十一、沙門氏菌測試片使用說明 十二、金黃色葡萄球菌測試片使用說明 十三、副溶血弧菌測試片使用說明 十四、大腸桿菌O157測試片使用說明 十五、阪崎腸桿菌測試片使用說明 十六、蠟樣芽胞桿菌測試片使用說明 一、適用范圍 適用于生活飲用水及其水源水生指標(biāo)菌與致病菌的日常監(jiān)測以及應(yīng)急檢測需要。 二、實驗前的準(zhǔn)備工作及操作中的注意事項 1 開展微生物快速檢測所需的基本條件 1.1 一間通風(fēng)良好、面積不需要很大的獨立房間，房間里備有紫外線消毒燈，洗手盆，實驗臺。應(yīng)急檢測時，臨時性的房間應(yīng)注意工作環(huán)境的的消毒（如采用84消毒液消毒等），并備好酒精燈。 1.2 一臺高壓鍋或紅外線消毒柜（家用消毒碗柜也可。）應(yīng)急檢測時，應(yīng)備好消毒液，含氯消毒液的濃度在250ppm時，器皿消毒應(yīng)保持5分鐘以上。 1.3 一臺小型恒溫培養(yǎng)箱； 1.4 有條件時，配備一臺普通冰箱，用于存放樣品； 1.5 水質(zhì)微生物采樣檢測箱，箱內(nèi)備有采樣用具與實驗用的一些工具和器皿； 1.6 檢測用試紙與試劑盒。 2 移液器的消毒 2.1 移液器管頭的消毒：將管頭放入錫箔袋或用錫箔紙包好，放入民用紅外線消毒柜中消毒；或?qū)⒐茴^放入消毒液中浸泡，取用時注意甩干消毒液并用無菌生理鹽水沖洗三次。 3. 無菌操作和注意事項 3.1點燃酒精燈，營造局部無菌環(huán)境。取樣和加樣時盡量靠近酒精燈操作。能用火焰消毒的操作工具如鑷子、剪子、長柄勺、小刀等應(yīng)在酒精燈上消毒后使用。 3.2 用75%酒精棉球?qū)⑹帜ú料尽?/span> 3.3 廢棄物及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。 三、生活飲用水微生物常規(guī)指標(biāo)及限值 根據(jù)國家生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB 5749—2006），常規(guī)的微生物指標(biāo)及限值如下：
MPN表示zui可能數(shù)；CFU表示菌落形成單位。當(dāng)水樣檢出總大腸菌群時，應(yīng)進一步檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群；水樣未檢出總大腸菌群，不必檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群。 四、檢測流程圖 五、菌落總數(shù)測試片使用說明 1 原理及適用范圍：菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的檢測項目指標(biāo)。菌落總數(shù)測試片（Aerobic Count Plates BB202）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑——氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紫紅色或粉紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強計數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于食品及水中菌落總數(shù)的測定，也可用于與食品接觸的容器操作臺和其他設(shè)備表面的衛(wèi)生檢測。 2 樣品處理與稀釋 2.1 生活飲用水：取充分混勻的水樣（原液）檢測。 2.2 水源水：以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。 2.3 食品：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，充分混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。 3 接種：將菌落總數(shù)測試片（BB202）置于實驗臺面，揭開上層膜準(zhǔn)備接種。生活飲用水、純水和礦泉水取原液，每個樣品做兩片；水源水以及食品選擇2～3個稀釋度進行檢測，每個稀釋度同時應(yīng)做一平行接種。以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL混勻的樣品液，慢慢均勻地滴加到測試片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每次檢測，同時將1mL滅菌生理鹽水滴加到另一片測試片上作為空白對照。 4 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。 5 結(jié)果判讀: 細菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（10～100個）的測試片進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（克）樣品中所含的細菌菌落總數(shù)。作菌落計數(shù)時，可用眼睛直接觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各測試片菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計算時用。 6 計數(shù)原則及報告方式 6.1通常選擇菌落在10～100個之間的測試片進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1實例1）。 6.2若有兩個稀釋度的菌落數(shù)在10～100個之內(nèi)，兩者的比值小于2，則取其平均數(shù)，若大于2，則用值小者（見表1實例2、例3）。 6.3若三個稀釋度的菌落數(shù)都有在10～100個之內(nèi)，應(yīng)選擇二個低數(shù)值的平均數(shù)（見表1實例4）。 6.4若三個稀釋度的菌落數(shù)均小于10個或大于100個時，應(yīng)重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數(shù)；或采用均小于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui小值，或采用均大于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui大值（見表1實例5、例6）。 6.5若所有稀釋度的測試片均無生長，以未檢出報告之。菌落數(shù)在100以內(nèi)時按實有數(shù)報告，大于100時，采樣兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示。 表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報告方式
7 表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 六、飲用水大腸菌群檢驗紙片使用說明（五管法） 1 適用范圍：適用于飲用水中總大腸菌群的快速檢驗。 2 方法原理：將乳糖、顯色劑和選擇性培養(yǎng)基加載在紙片上，經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。 3操作方法 3.1用滅菌吸管吸取10mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中，均勻涂布，共做5個重復(fù)； 3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。 3.3觀察每片顏色變化，若紙片保持紫藍色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點或片狀紅暈為大腸菌群陽性。 3.4根據(jù)陽性反應(yīng)紙片數(shù)，查MPN表得出水樣中總大腸菌群的MPN值（見表2）。如所有紙片均為陰性時，可報告總大腸菌群未檢出。 3.5 對于陽性紙片，應(yīng)進一步檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群。用無菌鑷子在陽性菌斑處挑取少許帶菌濾紙，用3mL無菌水混勻，接種到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上，進行44.5℃培養(yǎng)和檢驗。 表2 用5份10mL水樣時各種陽性和陰性結(jié)果組合時的zui可能數(shù)（MPN）
七、水質(zhì)大腸菌群檢驗紙片使用說明（十五管法） 1 適用范圍：適用于水源水中總大腸菌群的快速檢驗。 2 方法原理：將乳糖、顯色劑和選擇性培養(yǎng)基加載在紙片上，經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。 3操作方法 3.1 用滅菌吸管吸取10mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中，均勻涂布，共做5個重復(fù)；分別取1mL水樣加到小紙片中，共接5個重復(fù)；另取1mL水樣加到9mL無菌水中混勻，用1mL滅菌吸管分別吸取1mL（即0.1mL水樣）,加到zui后5片小紙片中。 3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。 3.3 觀察每片顏色變化，若紙片保持紫藍色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點或片狀紅暈為陽性。 3.4 根據(jù)每個稀釋度的陽性反應(yīng)紙片數(shù)，查MPN表（表3）可得出水樣中總大腸菌群的MPN值。 3.5 對于陽性紙片，應(yīng)進一步檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群。用無菌鑷子在陽性菌斑處挑取少許帶菌濾紙，用3mL無菌水混勻，接種到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上，進行44.5℃培養(yǎng)和檢驗。 八、總大腸菌群檢測試劑盒使用說明 1.適用范圍：適用于二次供水、自來水、水源水、生活飲用水、礦泉水等樣品中總大腸菌群檢測。對污染較嚴(yán)重的樣品采用十五管法，其它可采用五管檢測法。 2.方法原理：與國標(biāo)法相同。事先將乳糖蛋白胨培養(yǎng)基雙料、乳糖蛋白胨培養(yǎng)基單料濃縮至試劑盒培養(yǎng)孔中，隨時取用。 3.操作方法： 3.1十五管法：用無菌吸管吸取5個10mL水樣分別加入到試劑盒1號～5號5個大發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。吸取5個1mL水樣分別加入到試劑盒7號～11號5個小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。吸取5個用滅菌生理鹽水稀釋后的1:10稀釋液1mL加入到試劑盒12號～16號小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。余孔可做對照。 3.2 五管法: 用無菌吸管吸取5個10mL水樣分別加入到試劑盒1號～5號5個大發(fā)酵培養(yǎng)基管（孔）內(nèi)。余孔可做對照。 3.3 排氣泡:加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)次排出氣泡。 3.4 培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒置36℃± 1℃溫箱中，培養(yǎng)18h～24h。 3.5 觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性結(jié)果，可根據(jù)試劑盒的陽性管數(shù),參照國標(biāo)GB/T5750.12-2006的方法，查表 MPN檢索表（表2或 表3），報告每100mL水樣中的總大腸菌群zui可能數(shù)。如需對陽性結(jié)果進一步證實，可參考GB/T5750.12-2006方法進行。如所有管數(shù)均為陰性時，可報告總大腸菌群未檢出。 4. 注意事項： 4.1加入樣品后不需搖勻，平拿平放。 4.2 加樣時可用一次性無菌塑料吸管，將樣品稀釋液加至試劑盒所標(biāo)刻度處。 4.3 在培養(yǎng)箱中取試劑盒時應(yīng)平托出來，不要傾斜以免由于試劑盒的傾斜將陽性管集氣窗中的氣泡排出而影響結(jié)果。 4.4 試劑盒為一次性無菌用品，供一次性使用。 表3 十五管法總大腸菌群（MPN）檢索表 （總接種量55.5 mL，其中5份10 mL水樣，5份1mL水樣，5份0.1 mL水樣）
續(xù)表
續(xù)表
九、大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片使用說明 1.適用范圍：適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗 2.方法原理：耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform bacteria）是總大腸菌群的一部分．將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌（E.coli） 是zui準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片運用酶底物技術(shù)，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的顯色底物（XGLUC/blue），以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的顯色底物（SalmonGal/red）,經(jīng)過44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍色，紅色或紫藍色菌斑都屬耐熱大腸菌群。 3操作方法 3.1對于大腸菌群檢驗顯示陽性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉(zhuǎn)入2－3mL無菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。 3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。 4 結(jié)果判讀: 測試片上出現(xiàn)紅色或紫藍色菌斑都是耐熱大腸菌群陽性，其中紫藍色為大腸埃希氏菌陽性。沒有紅色或紫藍色斑點為陰性結(jié)果。 十、致病菌檢測試劑盒使用說明 1適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品中致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希氏菌（含腸出血性大腸桿菌O157:H7）、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測的檢測以及大腸菌群污染程度的檢測。 2方法原理：依據(jù)國標(biāo)GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術(shù)將相對應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時取用。 3樣品稀釋：同國標(biāo)法。液體樣品取原液。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液。 4致病菌檢測 4.1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml（不得少于4ml）分別加入到標(biāo)號為1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）內(nèi)。加樣后的1、2、3號分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液；A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。 4.2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18小時。 4.3 觀察結(jié)果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預(yù)示含有此種致病菌?？砂磭鴺?biāo)法進一步檢測。也可取陽性菌液1mL，加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內(nèi)，混勻，取1mL，接種到相對應(yīng)的測試片上，36℃±1℃培養(yǎng)18小時加以驗證。 5大腸菌檢測 5.1加樣：將試劑盒放在試驗臺面上，打開盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用滅菌吸管分別吸取3個1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi)，標(biāo)號為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對照孔使用。 5.2排氣泡：加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡。 5.3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時。 5.4觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性結(jié)果，陽性結(jié)果的孔數(shù)越多，說明污染越嚴(yán)重。 6 注意事項 6.1致病菌檢測與大腸菌檢測可同時進行；加入樣品后不需搖勻；大腸菌檢測培養(yǎng)前一定要排氣泡，排氣泡的方法與結(jié)果觀察可參見中大腸菌試劑盒使用說明中的圖像顯示；在培養(yǎng)箱中取試劑盒時注意平托出來，避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽性集氣窗中的氣泡流失而影響結(jié)果判斷。 6.2試劑盒為一次性無菌包裝用品，供一次性即開即用，。 7 保存條件和有效期：避光保存于陰涼干燥處，溫度為2～8℃，有效期18個月。 十一、沙門氏菌測試片使用說明 1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中沙門氏菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。沙門氏菌屬腸道細菌科，包括那些引起食物中毒、導(dǎo)致腸胃炎、傷寒和副傷寒的細菌。能引起食物傳播性疾病，近年來，已經(jīng)成為zui常見的食物中毒原因。腸炎沙門氏菌感染通常源于奶制品、禽產(chǎn)品和肉產(chǎn)品；雞肉和雞蛋尤其是高風(fēng)險食品。沙門氏菌感染的癥狀通常是腸胃出現(xiàn)問題，包括惡心、腹部絞痛、嘔吐和腹瀉，一般zui多持續(xù)7天。在免疫力低下的人群中，如果不及時服用抗生素類藥品，沙門氏菌感染將導(dǎo)致生命危險。沙門氏菌測試片（Salmonella Count Plate BS205）含有選擇性培養(yǎng)基、沙門氏菌*辛酯酶的顯色指示劑和高分子吸水凝膠，運用微生物測試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15-24h就可確認(rèn)是否帶有沙門氏菌。 2 操作方法 2.1 樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。 2.2 接種：將沙門氏菌測試片（BS205）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。 2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。 3 結(jié)果判讀: 對測試片進行觀察，呈紫紅色的菌落為沙門氏菌；呈藍色的菌落為其他菌群。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。 4 附加說明 4.1有關(guān)驗證試驗表明，接純菌種（包括硫化氫陰性菌株）可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，其他腸桿菌呈藍色，葡萄球菌不生長。 4.2測試片具有較強的敏感性，在1.5×10-8稀釋時仍可計算出菌落。臨床實際應(yīng)用結(jié)果顯示陽性檢出率高于分離培養(yǎng)法1.84‰，復(fù)查準(zhǔn)確率提高約13.0%（中國衛(wèi)生檢驗雜志2006,16（8）：954-955.）。 4.3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。 十二、金黃色葡萄球菌測試片使用說明 1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中金黃色葡萄球菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus簡稱金葡菌）是人類zui常見的致病菌之一，其侵襲力很強，能產(chǎn)生多種致病物質(zhì)如：腸毒素、凝固酶等；可引起化膿性炎癥、毒素性疾病及葡萄球菌性腸炎。金葡菌所引起的中毒事件已成為世界性的公共衛(wèi)生問題，我國每年由金葡菌引起的食物中毒事件屢有報道。金黃色葡萄球菌測試片（Staph Count Plate BT206）含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑，運用微生物測試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15-24h就可確定出病原菌的存在。 2 操作方法 2.1 樣品處理：：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。 2.2 接種：將金黃色葡萄球菌測試片（BT206）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。 2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。 3 結(jié)果判讀:紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌；呈藍色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。 4 附加說明 4.1有關(guān)驗證試驗表明，金黃色葡萄球菌測試片接純菌種可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，普通大腸桿菌呈藍色菌落，而沙門氏菌，變形桿菌在測試片上不生長。測試片的敏感度為1.2×10-8。通過檢測211份糕點、熟肉、鮮肉和奶制品樣品，測試片法和國標(biāo)法的陽性率分別為10.43％和7.58％（中國衛(wèi)生檢驗雜志2007，17（8）：1456－1457.）。 4.2山東省疾病預(yù)防控制中心的驗證結(jié)果表明，當(dāng)金黃色葡萄球菌在0～9個菌落范圍內(nèi)時，測試片與血平板均能檢出，作為致病菌不得撿出的標(biāo)準(zhǔn)要求，可以作為金黃色葡萄球菌檢驗應(yīng)用。 4.3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。 十三、副溶血弧菌測試片使用說明 1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中副溶血弧菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一種廣泛分布于海洋與鹽湖中的嗜鹽性細菌，海產(chǎn)品中常有此菌，它是引起食源性疾病的主要病原之一，是夏、秋季沿海地區(qū)食物中毒和急性腹瀉的重要病原。據(jù)國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)統(tǒng)計，我國近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢，已成為我國一個嚴(yán)重的食源性公共衛(wèi)生問題之一。該菌引起的食物中毒臨床上表現(xiàn)為：上腹部疼痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱等，腹瀉多為水樣便，亦有大便膿血，隨后腹部劇烈疼痛，持續(xù)1-2天。副溶血弧菌測試片（BH209）是一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有高選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分，培養(yǎng)15～24小時就可確認(rèn)是否有病原菌的存在。 2 操作方法 2.1 樣品處理：：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。 2.2 接種：將副溶血弧菌測試片（BH209）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。 2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。 3 結(jié)果判讀: 呈紫紅色的菌落為副溶血弧菌。多數(shù)非目的菌在測試片上不生長，少數(shù)能生長，如創(chuàng)傷弧菌和霍亂弧菌，但菌落呈藍色，明顯區(qū)別于目的菌。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。 4 附加說明 4.1 汕頭出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心的對比試驗結(jié)果表明，副溶血弧菌測試片具有較高的檢測靈敏度和準(zhǔn)確性，對純菌的檢測靈敏度達到8cfu/mL，與SN標(biāo)準(zhǔn)方法符合率達到90%以上。 4.2 注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。 十四、大腸桿菌測試片使用說明 1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中大腸桿菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。腸出血性大腸桿菌O157:H7是一種新出現(xiàn)的食物傳播性疾病的病因。它除引起腹瀉、出血性腸炎外，還可發(fā)生溶血性尿毒綜合癥、血栓性血小板減少性紫癜等嚴(yán)重的并發(fā)癥。自1982年美國*發(fā)現(xiàn)因該致病菌引起的食物中毒以來，腸出血性大腸桿菌O157:H7疫情開始逐漸擴散和蔓延，相繼在英國、加拿大、日本等多個國家引起腹瀉爆發(fā)和流行。我國已陸續(xù)有十余個省份在市售食品、進口食品、腹瀉病患者、家畜家禽等分離到大腸桿菌O157:H7。大腸桿菌測試片（BO204）采用進口高選擇性培養(yǎng)基作為主要原料，加入特異性酶顯色劑，運用微生物測試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15～24h就可確認(rèn)。 2 操作方法 2.1 樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。 2.2 接種：將大腸桿菌測試片（BO204）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。 2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。 3 結(jié)果判讀: 對測試片進行觀察，呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157:H7；呈藍色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。 4 附加說明 4.1本品所用培養(yǎng)基已在國外得到比較廣泛的應(yīng)用，有關(guān)驗證試驗表明，接純菌種可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，靈敏度達到98%（K.A. Betheim. 1998. J. Clin. Microbiol. 85：425-428）。 4.2本公司檢測大腸桿菌測試片對純菌的檢測靈敏度為0.5 cfu/mL，3次試驗結(jié)果測試片與平皿的符合率平均達到96.3％。 4.3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。 十五、阪崎腸桿菌測試片使用說明 1 適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品等中阪崎腸桿菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。 2 方法原理：測試片是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，由阪崎腸桿菌選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異性酶顯色劑等組成，一步培養(yǎng)15～24小時就可確定出目標(biāo)菌的存在。 3操作方法 3.1樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。 3.2接種：將測試片置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每個樣品接種2片。 3.3 培 養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。 3.4 結(jié)果判別: 對測試片進行觀察，呈藍綠色的菌落為阪崎腸桿菌。對于出現(xiàn)陽性菌落的樣品，用其他方法作進一步的鑒定。 4 附加說明 4．1阪崎腸桿菌純菌株產(chǎn)生典型的藍綠色點，接種一些腸道菌如大腸桿菌、腸炎沙門氏菌等時，一加樣下去就會出現(xiàn)有紫色的點或暈狀，此為產(chǎn)品本身顯色劑的原因，不影響產(chǎn)品的使用和結(jié)果判讀；而金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157和副溶血性弧菌等均被抑制。 4．2本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測，用取樣棉簽涂抹被測物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測試片上。 4．3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。 十六、蠟樣芽胞桿菌測試片使用說明 1 適用范圍：適用于生活飲用水、水源水、食品以及人體體檢樣品中蠟樣芽胞桿菌的檢測。以及突發(fā)事件應(yīng)急檢測需要。 2方法原理：采用一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有高選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分，培養(yǎng)15～24小時就可確認(rèn)是否有目標(biāo)菌的存在。 3操作方法 3.1樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。 3．2接種：將測試片置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每個樣品接種2片。 3．3培 養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。 3．4結(jié)果判別:對測試片進行觀察，蠟樣芽胞桿菌產(chǎn)生典型的藍綠色點，而大部分非目標(biāo)菌如大腸桿菌、大腸桿菌O157、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌和阪崎腸桿菌等均被抑制。 4附加說明 4．1本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測，用取樣棉簽涂抹被測物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測試片上。 4.2注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。 4．3出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
